RiboNAT™ Kit de prueba estéril rápida

RiboNAT ™ Kit de prueba estéril rápida

En la prueba de Seguridad de los medicamentos inyectables, el método de prueba estéril estipulado en la Farmacopea multinacional debe cultivarse durante al menos 14 días. Sin embargo, algunos tratamientos celulares deben ser infundidos a los pacientes en los días posteriores al parto, lo que dificulta completar las pruebas estériles antes de la administración, lo que también conduce a una creciente demanda de métodos de detección estériles que puedan proporcionar resultados más rápido para mejorar la seguridad de los pacientes.

RiboNAT ™ Es un kit de detección rápida y estéril que utiliza la tecnología de detección de amplificación de ácidos nucleicos (nat), que puede completar la detección en solo 7 horas, lo que reduce considerablemente el tiempo de detección en comparación con los métodos tradicionales. A diferencia de las pruebas tradicionales de nat, que solo están dirigidas al ADN genómico de microorganismos, RiboNAT ™ Lo que se detecta es el ARN ribosomal (arn). Debido a los altos niveles de ARN en los microorganismos, esto hace que la detección sea más sensible. Al mismo tiempo, los métodos tradicionales son propensos a falsos positivos debido al ADN residual de bacterias muertas o al ADN contaminado en el medio ambiente y los materiales, mientras que ribonat ™ Este problema se reduce efectivamente y se mejora la precisión de la detección.

◆ características

● Los resultados se pueden obtener el día de la prueba (aproximadamente 7 horas)

● detección con PCR retrotranscripcional en tiempo real ARN (rt - RT pcr), sensibilidad superior a la detección con gdna (9 CFU / ml)

● Reducir los falsos positivos causados por bacterias muertas y ADN residual

● una sola vez se puede detectar simultáneamente una variedad de bacterias (aeróbicas y anaeróbicas) y hongos

◆ proceso experimental

◆ especificaciones del kit de prueba

◆ composición del kit

◆ detección de sensibilidad

Figura 1. sensibilidad de detección

Para los seis microorganismos estipulados en la farmacopea, se preparó una suspensión microbiana con una concentración de 9 CFU / ML. Aprovechar el ribonat ™ Extraer ARN de estas suspensiones y detectar ARN ribosomal (arn). El ARN de todos los microorganismos se detectó con éxito, y el valor de CT fue inferior a 35.

Figura 2. sensibilidad de detección en muestras de suspensión celular

Para los seis microorganismos especificados en la farmacopea, se preparó una suspensión microbiana con una concentración de 9 CFU / ml, que se comparó con 0,25 × 10, respectivamente.⁶ Mezcla de células hek293 de Cells / ML. Aprovechar el ribonat ™ Extraer el ARN de la suspensión mixta y detectar el arn. El ARN de todos los microorganismos se detectó con éxito, y el valor de CT fue inferior a 35.

Además, se detectaron las seis cepas en las siguientes condiciones (los datos no se muestran):

· células madre mesenquimales (msc): 0,5 × 10⁶células/ml

· Célula T: 1,0 x 10⁶células/ml

◆ método de detección con mayor sensibilidad

■ concentración de bacterias: 2 CFU / ML

■ tiempo de incubación: 3 a 15 horas

Figura 3. métodos de detección con mayor sensibilidad

Para Aspergillus brasiliensis, Clostridium sporogenes y propionato de acné, se prepararon concentraciones de2 UCFSuspensión microbiana. Aunque ribonat ™ El tiempo de incubación estipulado en el proceso de operación convencional es de 3 horas, pero el experimento retrasa el tiempo de incubación a 3 - 15 horas. Después de la incubación, use ribonat ™ Extraer el ARN y detectar el arn. Los resultados mostraron que las tres cepas, incluyendo la bacteria anaeróbica estricta (haloxylon sporogénica) y la bacteria de crecimiento lento (propionium acné), fueron detectadas con éxito después de 14 horas o más de incubación, con valores de CT inferiores a 35.

◆ reducir los falsos positivos

RiboNAT ™ Contiene reactivos de inactivación de ADN de bacterias muertas y pasos de tratamiento de dnase, que pueden reducir efectivamente el riesgo de falsos positivos causados es es por el ADN residual en la muestra.

Figura 4. reducción de falsos positivos

La prueba de ácido nucleico bacteriano (nat) se realiza utilizando PBS estériles comercializados como muestras de prueba. Uno de los experimentos (arriba), que utiliza kits de mercado para extraer adn, se somete a una prueba PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real dirigida a bacterias. Otro grupo de experimentos (abajo), con ribonat ™ Se extrajo el ARN y luego se realizó una prueba PCR cuantitativa de retrofluorescencia en tiempo real. Se observan seis curvas de amplificación en el método basado en el adn, mientras se utiliza ribonat ™ No se ha detectado ninguna señal amplificada.

◆ lista de productos