Kit de PCR cuantitativo fluorescente para el método de tinte tipo 1 de circovirus porcino

Circovirus porcinoKit de PCR cuantitativo fluorescente para el método de tinte tipo 1
Circovirus porcino 1 (PCV-1)

Productos y características:
Kit de PCR cuantitativo fluorescente para el método de tinte tipo 1 de circovirus porcinoTiene las siguientes características:

1. está listo para abrir y usar, y los usuarios solo necesitan proporcionar muestras de virus.

2. los Primers específicos diseñados de acuerdo con la secuencia conservadora del método de tinte tipo 1 del circovirus porcino no tienen reacciones cruzadas con virus relacionados.

3. la sensibilidad puede alcanzar cientos de copias / reacciones.

4. detección PCR cuantitativa fluorescente en un solo tubo para evitar la contaminación posterior.

5. este Kit es suficiente para la PCR cuantitativa fluorescente del sistema de reacción de 20 μl 50 veces.

6. este producto solo es adecuado para la investigación científica y no se puede utilizar para el diagnóstico clínico.

Transporte y conservación: Transporte a baja temperatura,Conservación a - 20 ° c con una validez de un año.

Reactivos propios: Plantilla de adn, 10 × rox (según el modelo, consulte el método de uso).

Modo de empleo I,DiluciónControl positivo PCR(con10e2 - 10e7 copia / μl estas 6 diluciones de 10 veces como ejemplo)

1. tenga en cuenta que debido a que la concentración del estándar es muy alta, las siguientes operaciones de dilución deben llevarse a cabo en áreas independientes y no deben contaminar la muestra ni otros ingredientes de este kit. Para aumentar la estabilidad del producto y evitar la propagación de patógenos infecciosos, este producto no proporciona muestras vivas como controles positivos, sino que solo proporciona fragmentos de ADN que se pueden utilizar directamente como controles positivos.

2. marque 6 tubos centrífuga, 7, 6, 5, 4, 3, 2, respectivamente.

3. agregue un diluyente de plantilla especial para PCR fluorescente de 45 μl con una cabeza de pistola con núcleo (lo mejor es usar una cabeza de pistola con núcleo, el mismo a continuación).

4. añadir 5 μl 1 × 10e8 copias / μl de control positivo en el tubo 7, sacudir completamente durante 1 minuto, y obtener 1 × 10e7 copias / μl de control positivo. Poner hielo para usar.

5. cambie la cabeza de la pistola, agregue un control positivo de 5 μl 1 × 10e7 copias / μl en el tubo 6 (obtenido de la dilución anterior), agite completamente durante 1 minuto y obtenga un control positivo de 1 × 10e6 copias / μl. Poner hielo para usar.

6. cambie la cabeza de la pistola, agregue un control positivo de 5 μl 1 × 10e6 copias / μl al tubo 5 y sacude completamente durante 1 minuto para obtener un control positivo de 1 × 10e5 copias / μl. Poner hielo para usar.

7. repita la operación anterior hasta obtener un control positivo de 6 diluciones. Poner hielo para usar.

II. muestrasPreparación del ADN:

8. si hay N muestras, se deben configurar n + 2 extracciones, y la más es PC (control positivo de la preparación de muestras),

Uno esNC (control negativo de la preparación de muestras). El número 4 (concentración de 1 × 10e4 copias / mu l, 10 μl equivalente a 10000 copias) o el número 5 (concentración de 1 × 10e5 copias / mu l, 10 μl equivalente a 100.000 copias), que se pueden preparar en un paso de 10 μl, más una cierta cantidad de agua hacen que el volumen total sea el mismo que el volumen requerido para cada preparación, como PC. además, el agua se utiliza como nc. si cada preparación requiere 200 μl de muestra, el volumen de PC y NC también debe ser de 200 μl.

9. Purificación de la muestra por método opcionalDNA， Este Kit es compatible con la mayoría de los kits de preguntas de ADN viral en el mercado. También se puede comprar el virus de un solo tubo de la compañía, dnaout, o su versión actualizada del virus de columna, dnaout. Este Kit regala 15 veces el virus de un solo tubo dnaout de forma gratuita..

III. configuraciónReacción qpcr (sistema de 20 μl, realizada en la Sala de preparación de muestras):

10. Si solo se haceUna repetición marca n + 9 tubos pcr, de los cuales n + 2 se utilizan para n + 2 obtenidos en el paso anterior.

Muestras,Uno se utilizó para el control negativo de PCR y seis para el control positivo de pcr. Si se repite 2 - 3 veces, el número de ajustes de reacción aumentará 2 o 3 veces en consecuencia.

11. Añadir los ingredientes al tubo marcado siguiendo la tabla (esta tabla solo se repite una vez. el tubo de muestra y el control negativo no se establecen hasta que se establece el control positivo, y las muestras de control positivo se añaden después de que todos los tubos estén tapados y almacenados):

Nota: solo los instrumentos abi7500, 7700 y 7900 requieren el uso de rox como control, otros instrumentos PCR fluorescentes (por ejemplo iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 Y lightcycler480) no es necesario usar rox, se reemplaza por agua.

12. después de tapar, sube a la máquina y realiza PCR de acuerdo con los siguientes parámetros (los parámetros PCR específicos se pueden optimizar por sí mismos según el instrumento).

13. adquisición de datos

La operación específica se realiza de acuerdo con el proceso recomendado por el instrumento utilizado. Los tintes fluorescentes contenidos en este producto no se unenEn el adn, el espectro máximo de absorción es de 471 nm, en combinación con el adn, el espectro máximo de absorción es de 500 nm y el espectro máximo de emisión es de 530 nm. la adquisición de señales se puede configurar en pasos de renaturalización o extensión.

4. procesamiento de datos:

14. si este kit se utiliza para la detección cuantitativa, se dibuja la curva estándar con el valor de registro de la concentración de control positivo como eje transversal y el valor CT como eje longitudinal. A continuación, se calcula el valor de registro de la concentración de ADN de la muestra a partir de la curva estándar con el valor CT de la muestra a medir, y luego se calcula su concentración.

15. si este kit se utiliza para una prueba cualitativa y solo se juzga positivo o negativo, el control negativo CT debe ser superior o igual a 40. El control positivo debe tener un crecimiento logarítmico de fluorescencia, una curva de amplificación típica y un valor CT inferior o igual a 30. Las muestras analizadas serán negativas si su CT es superior o igual a 40 y positivas si son inferiores o iguales a 35. Si está entre 35 - 40, repite una vez. El valor de CT del experimento repetido es negativo si es superior o igual a 40, y positivo si es inferior a 40.

Solo para investigación científica y no para pruebas clínicas y tratamiento.