Células de neuroma cerebral de ratón neuro2a (n2a)

Introducción celular

ClonaciónNeuro-2AEs porR.J. KlebeyF.H. Ruddlea través deAEstablecimiento de tumores autóctonos en ratones blancos. La célula produce una gran cantidad de microtubulina, que actúa como un sistema de contracción en las células nerviosas que responde al flujo axosférico.

Características celulares

1)Fuente:Neuroblastoma cerebral

2)Morfología:Células madre amebianas

3)Contenido:>1x10⁶ Número de células

4)Especificaciones:T25botellao1 mlEmbalaje de tubo de almacenamiento congelado

5) Uso:Solo para investigación científica.

Transporte y conservación:Hielo secotransporteY la recuperación sobrevive biencélula:（1(...)1 mlEmbalaje de almacenamiento congelado y transporte de hielo seco, después de la recepción-80El refrigerador se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente,Si se descubre que el hielo seco se ha volatilizado,La tapa del tubo de almacenamiento congelado se cae,Daño y contaminación celular, por favor póngase en contacto con nosotros de inmediato.contacto.2(...)T25Supervivencia de la reanimación de la botellacélulaEnvío a temperatura ambiente,RecibirDespués de llegar, siga el método de tratamiento después de la recepción celular.

Después de la recepción celularTratamiento:

1) después de recibir la célula,75%La pared de la botella desinfectante con alcoholT25Colocación de la botella37℃ la incubadora se coloca aproximadamente2-3hSi se encuentra que la botella de cultivo está rota, hay un derrame de líquido y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros a tiempo después de tomar una foto.

2) por favor, en4O5XConfirmar el Estado de la célula bajo el microscopio y tomar fotos de la célula recién recibida..10×,20×) cada uno2 - 3Se conservan una foto de la apariencia del frasco de cultivo como base para el Estado de la célula cuando se recibe después de la venta.

3(...)Células adherentes: las células están en37Colocar en la incubadora2-3hBajo el microscopio, se observa el crecimiento y la adherencia de las células, y algunas células adheridas se desprenden y se agrupan debido a la vibración durante el transporte expreso. Si se observa la densidad de crecimiento celular bajo el espejo, si60%A continuación, se puede eliminar el medio de cultivo de infusión en el frasco de cultivo (si hay células no adheridas que necesitan ser recicladas por centrifugación, la suspensión pesada se introduce en el frasco de cultivo original),Añadir un medio de cultivo especial recién preparado6-8 ml, en una caja de cultivo celular para continuar el cultivo. Si la densidad de crecimiento celular alcanza70% - 80%Lo anterior permite el tratamiento de paso de las células. Durante el proceso de transmisión, si las células que se desprenden debido al transporte de vibraciones necesitan ser recicladas por centrifugación.

4(...)Nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo especial recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Recomendación para la primera transmisión después de recibir la célulaT25Botella de cultivo1:2De generación en generación

I.Medio de cultivoYCultivoLiofilizaciónPreparación de las condiciones:

1)prepararMEMMedio de cultivo;de alta calidadSuero bovino fetal,10%V;Doble resistencia,1%.

2)Condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire,95%; dióxido de carbono,5%. temperatura:37℃，La humedad de la incubadora es70- 80%.

3)Criopreservación:90PorcentajeSuero,10% de DMSO，Uso actualactualacompañar.

II.célulaprocesar:

1)Recuperación de células congeladas::

Contendrá1 mlEl criotubo de la suspensión celular está en37Sacudir rápidamente y descongelar en un baño de agua, añadir a contiene4 - 6 ML especialLa mezcla es uniforme en el tubo centrífuga del medio de cultivo. En1000RPMCentrifugación en condiciones3-5 minutosDescartar el sobrenadante y suspender las células con un medio de cultivo especial. A continuación, se añade la suspensión celular al6 - 8 ML dedicadoEn el frasco (o placa de petri) del medio de cultivo37℃ cultivo durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2)Transmisión celular:SicélulaLa densidad alcanza80% - 90%，Es decirSe puede llevar a caboFormación generacional.

Para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos:

1. AbandonarCultivo shangqing, sin Calcio, iones de magnesiodePBSHumedecer las células1-2vez.

2. unirse0.25%..W / V) TripsinaEDTA de 0,53 mMEnEn la botella de cultivo()T25botella1-2 ml,T75botella2-3 ml(...)，Colocar37℃IncubadoraDigestión media1-2minuto(las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión)Sin embargoDespués se observa bajo un microscopioDigestión celularSituación,siLa mayoría de las células se redondeanY se caeRecuperar rápidamente la Mesa de operaciones y golpear suavementeUnos pocos golpesDespués del frasco de cultivounirse3-4 mlIncluyendo10%FBSEl medio de cultivo vieneterminarDigestión.

3.Mezclar suavemente y aspirar, en1000RPMbarraCentrifugación bajo pieza3-5 minutosAbandonar el líquido superior y reponer1-2 mlSoplar bien después del medio de cultivo.Presione la suspensión celular1:2La proporción se divide en NuevaT25En la botella, añadir6-8 mlNuevos medios de cultivo especiales configurados de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se basa en la situación real.1: 2 a 1: 5Proporción realizada.

3) Criopreservación celular:Después de recibir la célula se recomienda antes del cultivo3Se congeló un lote de semillas celulares para su uso experimental posterior. abajoT25Botellas como ejemplo;

1. célulaDurante la congelaciónsegúnEl proceso de transmisión celular recoge las células digeridas en un tubo centrífuga, que se puede contar con una placa de recuento de sangre para determinar la densidad de Criopreservación de la célula. La densidad de Criopreservación recomendada para las células generales es1×10⁶~ 1×10⁷Células vivas individualespor ml.

2. 1000rpmCentrifugadora3-5 minutosEliminar la parte superior de la limpieza. Las células se resuelven con el liofilizado celular preparado, de acuerdo con cada1 mlEl líquido liofilizado contiene1×10⁶~ 1×10⁷Células vivas individualespor mlAsignado a un congelador para asignar células al congelador, marcando el nombre, el álgebra, la fecha y otra información.

3. Colocar las células a congelar en una caja de enfriamiento programática,-80Pasar la noche en el refrigerador y luego transferirlo al recipiente de nitrógeno líquido para su almacenamiento. Al mismo tiempo, se registra la ubicación del congelador en el contenedor de nitrógeno líquido para su posterior consulta y uso.

Precauciones:

1. Todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en una plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. Se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.