NCI - h522 (células humanas de cáncer de pulmón de células no pequeñas)

NCI - h522 (células humanas de cáncer de pulmón de células no pequeñas)

Marca: Shanghai yanzun Biology
Número de células: 1x10,6 células
Vitalidad celular: 95% (vility by trypan Blue exclusion)
Nombre de la célula:NCI - h522 (células humanas de cáncer de pulmón de células no pequeñas)

Fuente del género: personas
Sexo y edad: hombre, 58 años
Fuente del tejido: pulmón
Características de crecimiento: crecimiento pegado a la pared
Morfología celular: epidermis
Especificaciones celulares: criostor 1 x 106cells / t25 o 1 ml
Condiciones de cultivo: rpmi - 1640 + 10% fetal bowine serum (fbs)
37 ℃, 5% de CO2
Condiciones de congelación: 90% FBS + 10% Dmso
Método de transmisión: de 1: 3 a 1: 6, de 1 a 2 días

Operación de cultivo celular
Transporte de hielo seco: debe transferirse inmediatamente al nitrógeno líquido para su conservación después de recibir la célula, o congelarse a corto plazo en el refrigerador - 80 ° c, o recuperarse directamente
Transporte a temperatura ambiente: después de recibir la célula, retire el frasco de cultivo celular de la Caja de embalaje inmediatamente y siga los siguientes pasos para cultivar y transmitir.
Transmisión celular: la densidad celular alcanza el 80% - 90%, lo que permite el cultivo de transmisión
Pasos de manipulación celular en el frasco de cultivo
Para las células cultivadas en la pared, antes del envío, llenaremos el medio de cultivo con todo el frasco de cultivo para reducir el desprendimiento de las células adheridas durante el transporte del producto.
1. después de recibir la célula, preste atención a observar si hay contaminación. Coloque el frasco de cultivo bajo un microscopio invertido para comprobar cuidadosamente si está turbio y contaminado por bacterias. Debido a que hay baches durante el transporte y algunas células también son sensibles a los cambios de temperatura, puede haber algunos casos en los que las células se caen y flotan. estas células siguen siendo células vivas. no las deseche. se puede usar de generación en generación después de la concentración centrífuga.
2. para las células adheridas a la pared, en el entorno del Gabinete de bioseguridad, se utiliza una bomba de vacío para eliminar el exceso de medio de cultivo en el frasco de cultivo, hasta unos 5 - 8 ML restantes, y luego se selecciona una incubadora de temperatura constante de 37 ° c con contenido adecuado de CO2 de acuerdo con el Medio de cultivo para cultivar y aflojar la tapa de la botella. Si la célula ya está llena del frasco de cultivo, pase de generación en generación de inmediato.
3. en el caso de las células suspendidas, en un ambiente de Gabinete de bioseguridad, las células del frasco de cultivo se transfieren al tubo centrífuga, 150 G se centrifugan durante 5 minutos, después de eliminar el sobrenadante, las células se dispersan con un medio de cultivo de 5 ml, se transfieren al nuevo frasco de cultivo y luego se cultivan en una incubadora termostática de 37 ° c con contenido adecuado de co2.
Pasos de operación de las células de criodepósito
Nota: para garantizar una alta tasa de actividad celular, descongelar y cultivar inmediatamente después de recibir el producto.
1. coloque el criodepósito en un baño de agua a 37 ° C y sacude de un lado a otro para descongelarlo rápidamente. Para evitar la contaminación, asegúrese de que la boca de almacenamiento congelado se coloque sobre el agua. El deshielo debe ser rápido, aproximadamente 1 minuto.
2. una vez que el líquido en el congelador se derrite, retire inmediatamente y rocíe la superficie del congelador con alcohol. A partir de este paso, las operaciones posteriores deben completarse en el Gabinete de bioseguridad.
3. transferir el líquido del criodepósito a un tubo centrífuga que contenga 5 ml de medio de cultivo final, centrifugar 150 G durante 5 minutos y eliminar el líquido superior con una bomba de vacío.
4. use el medio de cultivo para volver a suspender las células y transferirlas a un nuevo frasco de cultivo. Para garantizar la supervivencia de la reanimación celular, use el medio de cultivo después de precalentar el baño de agua a 37 ° c.
5. cultivar las células en una incubadora a temperatura constante de 37 ° C que contenga CO2 adecuado.
Cultivo de células adherentes
1. absorba y abandone el medio de cultivo en el frasco de cultivo y agregue PBS para humedecer una vez.
2. añadir 1 ml de solución de TRYPSIN - EDTA 0,25 (w / v) e incubar en una incubadora a 37 ° C hasta que las células se desprendan y se separen de la pared. Este proceso tarda unos 3 - 5 minutos.
3. añadir 2 ml de medio de cultivo para neutralizar la Tripsina y soplar suavemente para soplar las células fuera de la superficie del frasco de cultivo y dispersar las células.
4. recoger la suspensión celular en un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugar 150 G durante 5 minutos y eliminar el sobrenadante con una bomba de vacío. Tomar una cantidad adecuada de medio de cultivo para suspender la célula y transferirla a un nuevo frasco de cultivo para su cultivo.
La transmisión de células suspendidas puede referirse a los siguientes métodos:
I. Ley de transmisión directa
1. cuando las células suspendidas crezcan hasta el 80% - 90% (la suspensión celular se vuelve amarilla), se pueden transmitir;
2. aspirar 1 / 2 a 1 / 3 de la suspensión celular con una pajita;
3. añadir una cantidad adecuada de medio de cultivo fresco y continuar el cultivo.
II. método de paso por centrifugación (cuando se detectan fragmentos celulares)
1. transferir la suspensión celular a un tubo centrífuga;
2.150 G de centrifugación durante 5 minutos, abandonando el líquido claro superior;
3. uso de medios frescos para suspender las células;
4. la pajita absorbe la cantidad adecuada de suspensión celular, la carga en un nuevo frasco de cultivo, y luego agrega la cantidad adecuada de medio de cultivo fresco para continuar el cultivo.
Operación de Criopreservación celular
Centrifugación de 11000 RPM durante 5 minutos para eliminar el líquido superior. Añadir 1 ml de células de suspensión de suero, añadir suero y Dmso de acuerdo con el número de células, mezclar suavemente, la concentración final de Dmso es del 10%, la densidad celular no es inferior a 1 x 106 / ml, congelar 1 ml de suspensión celular en cada congelador, prestar atención al congelador para hacer un buen trabajo de identificación;
Coloque el criodepósito en la Caja de enfriamiento del programa, Póngalo en el refrigerador a - 80 ° C y pase al almacenamiento de nitrógeno líquido al menos 2 horas después.

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