Kms - 21bm células de mieloma múltiple humano

KMS-21BM_Células de mieloma múltiple humano

Información del producto

Nombre de la célula:Kms - 21bm células de mieloma múltiple humano

Fuente de la especie: persona

Sexo y edad: Mujeres,67año

Fuente de la organización: Derrame torácico

Características de crecimiento: Crecimiento suspendido

Morfología celular: Tipo de linfocitos

Especificaciones celulares: 1 X 10⁶Congelador Cells / t25 o 1 ml

Condiciones de cultivo:RPMI 1640 + suero bovino fetal al 10%,37 ℃, 5% de CO2

Condiciones de congelación: 90% de FBS + 10% de DMSO

Método de transmisión: 1:3 generaciones，2 - 3 días para transmitir una generación

Operación de cultivo celular

Transporte de hielo seco:Inmediatamente después de recibir la célula, debe transferirse al nitrógeno líquido para su conservación, o-80GradosCEl refrigerador se congela a corto plazo o se recupera directamente

Transporte a temperatura ambiente:Inmediatamente después de recibir la célula, retire el frasco de cultivo celular de la Caja de embalaje y siga los siguientes pasos para el cultivo y la transmisión.

Transmisión celular:La densidad celular alcanza entre el 80% y el 90%, lo que permite el cultivo de paso.

Pasos de manipulación celular en el frasco de cultivo

Para las células cultivadas en la pared, antes del envío, llenaremos el medio de cultivo con todo el frasco de cultivo para reducir el desprendimiento de las células adheridas durante el transporte del producto.

1. Después de recibir la célula, preste atención a observar si hay contaminación. Coloque el frasco de cultivo bajo un microscopio invertido para comprobar cuidadosamente si está turbio y contaminado por bacterias. Debido a que hay baches durante el transporte y algunas células también son sensibles a los cambios de temperatura, puede haber algunos casos en los que las células se caen y flotan. estas células siguen siendo células vivas. no las deseche. se puede usar de generación en generación después de la concentración centrífuga.

2. Para las células adheridas, en un ambiente de Gabinete de bioseguridad, se utiliza una bomba de vacío para eliminar el exceso de medio de cultivo en el frasco de cultivo, hasta unos 5 - 8 ML restantes, y luego se selecciona un contenido adecuado de CO2 de 37 de acuerdo con el medio de cultivo.℃Cultive en una incubadora de temperatura constante y afloje la tapa de la botella. Si la célula ya está llena del frasco de cultivo, pase de generación en generación de inmediato.

3. En el caso de las células suspendidas, en un ambiente de Gabinete de bioseguridad, las células del frasco de cultivo se transfieren al tubo centrífuga, 150 G se centrifugan durante 5 minutos, después de eliminar el sobrenadante, las células se dispersan con un medio de cultivo de 5 ml, se transfieren al nuevo vial de cultivo y luego se colocan en un contenido adecuado de CO2 de 37.℃Cultivar en una incubadora de temperatura constante.

Pasos de operación de las células de criodepósito

Nota: para garantizar una alta tasa de actividad celular, descongelar y cultivar inmediatamente después de recibir el producto.

1. Colocar el criodepósito en 37℃Se balancea de un lado a otro en el baño de agua y se descongela rápidamente. Para evitar la contaminación, asegúrese de que la boca de almacenamiento congelado se coloque sobre el agua. El deshielo debe ser rápido, aproximadamente 1 minuto.

2. Una vez que el líquido en el congelador se derrite, se extrae inmediatamente y se pulveriza con alcohol en la superficie del congelador. A partir de este paso, las operaciones posteriores deben completarse en el Gabinete de bioseguridad.

3. Transferir el líquido del criodepósito a un tubo centrífuga que contenga 5 ml de medio de cultivo final, centrifugar 150 G durante 5 minutos y eliminar el líquido superior con una bomba de vacío.

4. Después de usar el medio de cultivo, las células se resuelven y se transfieren a un nuevo frasco de cultivo. Para garantizar la supervivencia de la reanimación celular, coloque el Medio en 37℃Se utiliza después de calentar el baño de agua.

5. Colocar las células en 37 que contengan CO2 adecuado℃Cultivar en una incubadora de temperatura constante.

Cultivo de células adherentes

1. Absorber y abandonar el medio de cultivo en el frasco de cultivo y añadir PBSHumedecer una vez.

2. Adhesión 10,25 ml (p/v) Tripsina-EDTASolución y colocar en 37Incubar en una incubadora a ° C hasta que las células se desprendan y se separen de la pared. Este proceso requiere aproximadamente 3-5Min.

3. Adhesión 2mlNeutralizar la Tripsina después del medio de cultivo y soplar suavemente para que las células caigan de la superficie del frasco de cultivo y las dispersen.

4. Recoger la suspensión celular en15 mlEn el tubo centrífuga,Centrifugación de 150 G durante 5 minutos, eliminar el líquido superior con una bomba de vacío. Tomar una cantidad adecuada de medio de cultivo para suspender la célula y transferirla a un nuevo frasco de cultivo para su cultivo.

La transmisión de células suspendidas puede referirse a los siguientes métodos:

I. Ley de transmisión directa

1. Cuando las células suspendidas crezcan hasta el 80% - 90% (la suspensión celular se vuelve amarilla), se pueden transmitir;

2. usarpajitaAspirar y abandonar la suspensión celular 1 / 2 a 1 / 3;

3. Añadir una cantidad adecuada de medio fresco y continuar el cultivo.

   II. método de paso por centrifugación (cuando se detectan fragmentos celulares)

4. Transferir la suspensión celular aTubo centrífugaInterior;

5. 150 G de centrifugación durante 5 minutos, abandonando el líquido claro superior;

6. Uso de medios frescos para suspender las células;

7. La pajita absorbe la cantidad adecuada de suspensión celular y se carga en una nuevaBotella de cultivoAñadir una cantidad adecuada de medio fresco y continuar el cultivo.

Operación de Criopreservación celular

1. Centrifugar 1000 RPM durante 5 minutos para eliminar el líquido superior. Añadir 1 ml de células de suspensión de suero, añadir suero y Dmso de acuerdo con el número de células, mezclar suavemente，La concentración final de Dmso es del 10% y la densidad celular no es inferior a 1 x 10⁶/mL， Congelar 1 ml de suspensión celular en cada congelador, preste atención al congelador para hacer un buen trabajo de identificación.V;

2. Coloque el criodepósito en la Caja de enfriamiento del programa, Póngalo en el refrigerador a - 80 ° C y transfiera al depósito de nitrógeno líquido al menos 2 horas después.

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