Identificación de células de cáncer de mama humano au565 / Str

Identificación de células de cáncer de mama humano au565 / Str

Introducción celular

La línea celular au565 proviene del derrames Torácicos de pacientes con cáncer de mama en el laboratorio de ciencias biológicas del ejército Hai en oakland, California. La línea celular se estableció a partir de los mismos pacientes que SK - PR - 3 (atcc htb - 30). La paciente es una mujer blanca, de 43 años, de sangre tipo a +, que ha sido tratada con radiación, esteroides, ciclolinamida y 5 - fluorourimidina. La línea celular au565 amplificó y sobreexpresó el oncogen her - 2 / neu; Expresa los oncogenes her - 3, her - 4 y 53. Las células tratadas con ácido micofenólico (mpa), 12 - miristato de fobosol 13 - acetato (pma), ácido retinoico (ra) o anticuerpos monoclonales ta - 1 contra el dominio extracelular de la proteína her - 2 / neu pueden inducir la diferenciación celular. El tratamiento de las células au565 con el factor de diferenciación neu (ndf) también induce fenotipos maduros, caracterizados por la apariencia morfológica de las células. Las células au565 no tratadas tienen núcleos densos y un Citosol delgado, mientras que las células tratadas muestran formas relacionadas con el fenotipo diferenciado, como grandes núcleos planos rodeados de un Citosol sustancialmente grande.

Características celulares

1) fuente: mujer blanca, derrames Torácicos de 43 años

2) morfología: crecimiento de la muestra de piel superior pegado a la pared

3) contenido: > 1x106 número de células

4) especificaciones: embalaje de t25 botellas o 1 ml de tubo de almacenamiento congelado

5) uso: solo para investigación científica.

Transporte y conservación

Transporte de hielo seco y reanimación de células vivas

(1) transporte de hielo seco empaquetado en congelador de 1 ml, después de recibir, el refrigerador de - 80 grados se conserva durante la noche y se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado, la tapa del congelador se ha caído, la tapa del congelador está rota y las células están contaminadas, póngase en contacto con nosotros de inmediato.

(2) las células sobrevivientes de la recuperación de t25 se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

Tratamiento después de la recepción celular

1) después de recibir la célula, el 75% de la pared de la botella de desinfección con alcohol coloca la botella t25 en una incubadora de 37 ° C durante aproximadamente 2 - 3 horas. si se encuentra que la botella de cultivo está rota, hay un derrame de líquido y la célula está contaminada, Póngase en contacto con nosotros a tiempo después de tomar una foto.

2) confirme el Estado de la célula bajo un microscopio 4 o 5x, mientras toma una foto de la célula recién recibida (10 × 20 × cada una) y una foto de la apariencia del frasco de cultivo como base para el Estado de la célula en el momento de la recepción después de la venta.

3) células adheridas: las células se colocan en una incubadora a 37 ° C durante 2 - 3h para observar el crecimiento y la adherencia de las células bajo un microscopio, y algunas células adheridas se desprenden y se agrupan debido a la vibración durante el transporte expreso. Si se observa la densidad de crecimiento de las células bajo el microscopio por debajo del 60%, se puede eliminar el medio de cultivo de infusión en el frasco de cultivo (si hay células no adheridas que necesitan ser recicladas por centrifugación, se suspende en el frasco de cultivo original), se añade el medio de cultivo Quan recién preparado de 6 - 8 ml y se coloca en la Caja de cultivo celular para continuar el cultivo. Si la densidad de crecimiento celular alcanza más del 70% - 80%, la célula puede ser tratada de generación en generación. Durante el proceso de transmisión, si las células que se desprenden debido al transporte de vibraciones necesitan ser recicladas por centrifugación.

4) nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por el medio de cultivo quanquan recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Después de recibir la célula, se recomienda que el frasco de cultivo t25 pase de 1: 2.

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I. preparación de los medios de cultivo y las condiciones de congelación del cultivo

1) preparar el medio de cultivo rpmi - 1640 (recomendado icell - 0002); Suero bovino fetal de alta calidad, 10%; Doble resistencia, 1%.

2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

3) liofilizado: 90% suero, 10% dmso, listo para usar.

II. tratamiento celular:

1) recuperación de células congeladas:

El criodepósito que contiene 1 ml de suspensión celular se sacude rápidamente y se descongela en un baño de agua a 37 ° c, y se mezcla uniformemente en el tubo centrífuga que contiene 4 - 6 ml de medio de cultivo Wan wan. Centrifugar 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y suspender las células en el medio quan. A continuación, se añade la suspensión celular a 37 ° C en un frasco de cultivo (o placa de petri) que contiene 6 - 8 ml de medio Quan terminado para cultivar durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

Para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos.

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 0,25% (w / v) Tripsina Mei - 0,53 mm EDTA al frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), digerirlo en una incubadora a 37 ° C hasta que la capa celular se disperse (generalmente en 5 a 15 minutos) para que el medio alcance un pH normal (7,0 a 7,6), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, para evitar aglomeraciones, no golpear ni sacudir El matraz a la espera de la separación celular para agitar la célula. Las células difíciles de separar pueden colocarse a 37 ° C para facilitar la dispersión. Si la mayoría de las células se redondean y se caen, se devuelve rápidamente a la Mesa de operaciones, se golpea ligeramente el frasco de cultivo y se agrega 3 - 4ml de medio de cultivo que contiene 10% de FBS para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 minutos en condiciones de 1000rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir un nuevo medio de cultivo completo Wan configurado de 6 - 8 ml de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25;

1. al congelar las células, se recogen las células digeridas en el tubo centrífuga de acuerdo con el proceso de transmisión celular, y se puede contar con una placa de recuento de sangre para determinar la densidad de congelación de las células. La densidad de Criopreservación recomendada de las células generales es de 1 × 10 Mu 6 a 1 × 107 células vivas / ML.

2. centrifugar 1000 RPM durante 3 - 5 min y eliminar el sobrenadante. Las células se resuelven con el liofilizado celular preparado y se asignan a un liofilizador que contiene 1 × 10 ¿ 6 a 1 × 107 células vivas / ML por cada 1 ml de liofilizado para distribuir las células al liofilizado, marcando el nombre, el álgebra, la fecha y otra información.

3. coloque las células que se van a congelar en una caja de enfriamiento programada, pase la noche en un refrigerador de - 80 grados y luego pase a un recipiente de nitrógeno líquido para su almacenamiento. Al mismo tiempo, se registra la ubicación del congelador en el contenedor de nitrógeno líquido para su posterior consulta y uso.