Células de Glioma humano u373

Células de Glioma humanoU373

Introducción:Línea celular problemática: mal identificada/contaminada. Se ha demostrado que es un derivado de U-251MG. Esta línea celular no es la línea celular del astrocitoma original establecida en 1973 en la Universidad de Uppsala. Ver U-373MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_2818) para la línea celular original de U-373MG.

Número de artículo:WS-S1465

especificación:Vial de cultivo de 1 × 10 células / t25

I. información básica de la célula

- origen celular: cerebro

- morfología celular: tipo de célula epitelial, crecimiento pegado a la pared

- contenido celular: > 1 × 10 células / vial

- especificaciones de embalaje: botella de cultivo t25 / criodepósito de 1 ml

- uso del producto: solo para uso científico,No se puede usar como producto terapéutico para enfermedades animales o humanas.

En segundo lugar, Reglas detalladas para el tratamiento de las células a temperatura ambiente el día de la recepción

Paso: recepción e Inspección

· pasos 1 y 2 de la parte Ejecutiva (proceso general).

Paso 2: cambiar el medio de cultivo y la recolección celular

· detrás de la botella de desinfección, abra la tapa de la botella en la Mesa de trabajo súper limpia.

· reemplazar por un medio de cultivo regalado con la mercancía.

· especial atención: si se encuentra más suspensión celular bajo el microscopio, es necesario transferir todos los medios de cultivo en el frasco a un tubo centrífuga estéril, centrifugar (por ejemplo, 1200 rpm, 5 min) para recoger las células y abandonar el medio antiguo.

· después de completar el reemplazo o la recogida, coloque el frasco de cultivo en la incubadora y continúe reposando durante 2 - 3 horas.

Paso 3: postprocesamiento en reposo (según la densidad celular)

En tercer lugar, Pasos de la operación de transmisión celular

A. paso de células adherentes

1. preparación: absorber y abandonar el medio de cultivo antiguo.

2. enjuagar: añadir lentamente PBS y otros enjuagues a lo largo de la pared lateral del frasco de cultivo, sacudirlos suavemente y absorberlos para eliminar el suero residual.

3. digestión: agregue la enzima Yi precalentada (como t25 más 1 ml) y agite suavemente para que la enzima Yi cubra todas las células.

4. incubación: digestión a temperatura ambiente durante unos 2 minutos (el tiempo varía de una célula a otra).

5. observación: observar bajo un microscopio hasta que ≥ 90% de las células se redondeen y se caigan. Si no se alcanza, se puede comprobar cada 30 segundos.

6. terminación: cuando la célula se disuelve completamente, se añade inmediatamente un medio de cultivo precalentado que duplica el volumen de la enzima Yi para terminar la digestión.

7. soplar: soplar suavemente la pared de la botella con una pipeta para que las células se desprendan y se dispersen en suspensión unicelular.

8. centrifugación: transferir la suspensión celular a un tubo centrífuga, centrifugar 200 × G durante 3 - 5 minutos y descartar el sobrenadante.

9. suspensión pesada e inoculación: precipitación de células de suspensión pesada con una pequeña cantidad de medio de cultivo fresco, diluida en la proporción adecuada, inoculada en un nuevo frasco de cultivo.

10. cultivo: poner en la incubadora. Si se utiliza una tapa normal, asegúrese de aflojar la tapa para facilitar el intercambio de gas.

B. transmisión de células suspendidas

1. recogida y centrifugación: transferir toda la suspensión celular a un tubo centrífuga, centrifugar a 1000 RPM durante 5 minutos y descartar el sobrenadante.

2. suspensión pesada: añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo fresco y suspender suavemente las células.

3. vacunación: pasar la suspensión celular al nuevo frasco de cultivo t25 en una proporción de 1: 2 y complementar el medio total a 5 - 8 ML.

4. cultivo: poner en la incubadora para continuar el cultivo.

4, Manejo de problemas especiales: células adherentes que se desprenden durante el transporte

Algunas células que no están bien adheridas se caerán durante el transporte, lo cual es normal, siga los siguientes pasos:

1. recogida: transferir todos los medios de cultivo de la botella a un tubo centrífuga estéril y centrifugar (1200 rpm, 3 - 5 min) para descartarlo.

2. limpieza: suspensión de células con pbs, centrifugación nuevamente (1200 rpm, 3 - 5 min) para descartar el pbs.

3. digestión: añadir aproximadamente 1 ml de 0,25% de enzima yi, mezclar suavemente (no soplar violentamente) y colocarlo en una incubadora para digerir durante 1 - 2 minutos.

4. terminación y dispersión: después de la extracción, soplar suavemente para dispersar la masa celular, agregar rápidamente 3 - 5 ml de medio de cultivo para terminar la digestión y centrifugar (1200 rpm, 3 - 5 min) para descartar el sobrenadante.

5. suspensión pesada e inoculación: añadir 5 ml de medio de cultivo para suspensión pesada e inocular proporcionalmente en un nuevo frasco / placa de petri.

6. observación: Observación bajo el espejo. Si la célula es una sola o una pequeña masa de solo 3 - 5 células, se puede cultivar normalmente y esperar a que crezca pegado a la pared. - -

V, Resumen de la política de servicio post - venta

Nota importante: cualquier problema anormal,Tiempo para tomar fotosY contactar con nosotros es la clave para obtener apoyo post - venta.