Células de cáncer de endometrio humano efe184

Células de cáncer de endometrio humanoEFE184

Introducción:La línea celular efe184 se estableció a partir de la ascitis de una mujer de 69 años con cáncer de endometrio recurrente. La morfología de la célula es una célula epidémica de una sola capa, que crece muy lentamente. La línea celular efe184 se puede utilizar para el Cultivo celular 3D y la investigación del cáncer.

Número de artículo:WS-S1480

especificación:Vial de cultivo de 1 × 10 células / t25

I. información básica de la célula

- Fuente celular: in situ: útero; Lugar de metástasis: Ascitis

- morfología celular: tipo de célula epitelial, crecimiento pegado a la pared

- contenido celular: > 1 × 10 células / vial

- especificaciones del embalaje: botella de cultivo t25 / congelador de 1 ml

- uso del producto: solo para uso científico,No se puede usar como producto terapéutico para enfermedades animales o humanas.

II. medios de cultivo y condiciones de cultivo

1. medios de cultivo

Medio de cultivo rpmi1640; 10% suero bovino fetal; 1% doble resistencia

Suero recomendado:WinSera FBS500 - WP-002

2. condiciones de cultivo

- fase gaseosa: 95% de aire + 5% de temperatura de co2: 37 ° c; Humedad de la incubadora: 70% - 80%

3. almacenamiento congelado y almacenamiento

- liofilizado: 90% suero bovino fetal + 10% Dmso (ahora disponible)

- condiciones de almacenamiento: conservación a largo plazo del nitrógeno líquido

III. forma de transporte y recepción y tratamiento

1. envío a temperatura ambiente (t25 botellas de células vivas)

Después de recibir la célula, primero se alinea El Cuerpo de la botella de cultivo t25 se Desinfecta en la superficie; Coloque el frasco de cultivo en la incubadora y deje reposar durante 2 - 3 horas; Observar la densidad celular y el Estado de crecimiento, tomar 2 - 3 fotos claras para retroalimentar a las ventas; Se puede transmitir si la densidad celular cumple con los estándares, y se recomienda que la proporción de transmisión temprana sea de 1: 2; Después de que las células vuelvan a crecer, una de las botellas completas de células se congelará en un criodepósito de 1 ml, y la otra botella continuará transmitiéndose; Se recomienda congelar repetidamente 2 - 3 células de semillas antes de realizar experimentos de expansión para evitar la interrupción celular debido a emergencias.

Nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Recomendaciones para la transmisión posterior de la célula recibidas El frasco de cultivo t25 se transmite de acuerdo con 1: 2.

2. envío de hielo seco (células de almacenamiento congelado)

Los envíos regulares son Dos criodepósitos, se recomienda recuperar uno y conservar uno para reserva; Si la recuperación falla, operar la segunda rama estrictamente de acuerdo con el proceso de recuperación estándar del fabricante; Si la recuperación de ambos falla, guarde inmediatamente una foto de todo el proceso de recuperación y notifique el procesamiento de ventas con tiempo.

IV. pasos de cultivo celular

1. reanimación de células congeladas

- colocar el criodepósito de suspensión celular de 1 ML en un baño de agua a 37 ° C y Sacudirlo rápidamente hasta descongelarlo;

- mezclar suavemente en un tubo centrífuga que contenga un medio de cultivo de 4 - 6 ml;

Centrifugación de 1000 RPM durante 3 - 5 minutos, abandonando el líquido sobrenadante;

- Suspensión pesada de células con medio de cultivo, inoculada en un frasco / placa de Petri que contenga 6 - 8 ml de medio de cultivo;

- cultivar a 37 ° C durante la noche y observar el Estado de crecimiento celular y la densidad bajo un microscopio al día siguiente.

2. para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos: (la densidad celular es del 80% - 90% transitable)

Abandonar el sobrenadante de cultivo y lavar las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

- añadir el 0,25% (w / v) yiproteasa - 0,53 mm EDTA en el frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), digerir en una incubadora a 37 ° C durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de las células se redondean y se desprenden, volver rápidamente a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con un 10% de FBS después de golpear ligeramente el frasco de cultivo para terminar la digestión.

- - mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir un nuevo medio de cultivo configurado de 6 - 8 ml de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 - 1: 5 de acuerdo con la situación real.

3. para las células suspendidas, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

Nota: la proporción de transmisión recomendada es de 1: 2, y la proporción de transmisión posterior se puede decidir por sí misma de acuerdo con las necesidades del cliente.

- método 1: recoger las células, centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien, y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.

- método 2: se puede elegir el método de cambio de medio, después de descartar la mitad del medio de cultivo, colgar las células restantes y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 3.

4. Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

V. precauciones de bioseguridad

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en un Gabinete de bioseguridad de nivel Er para hacer un buen trabajo de protección personal; Todos los residuos líquidos y los utensilios que han estado en contacto con las células deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. al reanimar las células congeladas, asegúrese de usar guantes protectores, Fu protectores y máscaras protectoras hu; La inmersión del tubo de almacenamiento congelado puede filtrarse en nitrógeno líquido y llenarse de nitrógeno líquido. durante el deshielo, el nitrógeno líquido puede causar fácilmente daños como explosiones de contenedores y arañazos causados es es por el colapso de la tapa de la botella. asegúrese de tener cuidado al operar.