Línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano resistente a cisbo hct15 / DDP

Nombre de la célula:CEPA resistente a cisbo de células de adenocarcinoma colorrectal humanoHCT15/DDP　

Número de artículo:WS155(HCT15)STR 鉴定）　　

Especificaciones:Vial de cultivo 1 × 10 ⁶ Cells / t25

Uso: solo para investigación científica

I. introducción celular

La célula esUna línea celular resistente a los medicamentos DDP construida por células hct15.

II. características celulares

1) fuente: cáncer rectal

2) morfología: similar a las células epiteliales, crecimiento de la pared

3) contenido: > 1x106 número de células

4) especificaciones: embalaje de t25 botellas o 1 ml de tubo de almacenamiento congelado

5) uso: solo para investigación científica.

3. preparación del medio de cultivo y las condiciones de congelación del cultivo

1)Para más detalles, consulte las instrucciones.

Suero que recomendamos FBS500-WP-002

2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 grados centígrados, humedad de la incubadora del 70% al 80%.

3) liofilizado: 90% suero, 10% dmso, listo para usar.

4,Tratamiento celular

1) recuperación de células congeladas

ContendráEl criodepósito de 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se agregó al tubo centrífuga que contenía un medio de cultivo de 4 - 6 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y el medio de cultivoCélulas de suspensión pesada. A continuación, la suspensión celular se agregó al frasco de cultivo (o placa de petri) que contenía 6 - 8 ml de medio de cultivo para cultivar a 37 ° C durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

Para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos.

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir el 0,25% (w / v) pancreático Dan White Enzyme - 0,53 mm EDTA al frasco de cultivo (t25 1 - 2 ml, T75 2 - 3 ml), colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir durante 1 - 2 minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si una gran parte de la célula se redondea y se cae, recuperarla rápidamente a la Mesa de operaciones y añadir 3 - 4 ml de medio de cultivo con un 10% de FBS después de golpear ligeramente el frasco de cultivo para terminar la digestión.

3. mezclar suavemente y aspirar, centrifugar durante 3 - 5 min a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien. Dividir la suspensión celular en un nuevo vial t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de un nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se realiza en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

Atención: transmisión celularDespués de 1 a 2 veces, todavía se puede mantener la proliferación, lo que puede aumentar la concentración del medicamento a 0,5 ug / ML para continuar el cultivo; Si la célula deja de proliferar durante este proceso y está en mal estado, es necesario reducir la concentración del medicamento (reducir a la mitad la concentración del medicamento) o cultivarla con un medio de cultivo sin medicamentos, hasta una densidad celular de aproximadamente 8 × 105 / ml, y cuando el Estado de crecimiento es mejor, reemplazarla por la concentración del medicamento requerida.

3) Criopreservación celular: después de recibir la célula, se recomienda congelar un lote de semillas celulares durante las tres primeras generaciones de cultivo para su uso experimental posterior.

AbajoTomemos como ejemplo las botellas t25;

1. al congelar las células, se recogen las células digeridas en el tubo centrífuga de acuerdo con el proceso de transmisión celular, y se puede contar con una placa de recuento de sangre para determinar la densidad de congelación de las células. La densidad de Criopreservación recomendada de células generales es de 1 × 106 a 1 × 107 células vivas / ML.

Centrifugar 1000 RPM durante 3 - 5 min y eliminar el sobrenadante. Las células se resuelven con un liofilizado celular preparado, que contiene 1 × 106 a 1 × 107 células vivas / ML por 1 ml de liofilizado, se distribuye en un liofilizado para distribuir las células en el liofilizado, marcando el nombre, el álgebra, la fecha y otra información.

Nota: durante la Criopreservación de las células, no se pueden agregar medicamentos.

2. coloque las células que se van a congelar en una caja de enfriamiento programada, pase la noche en un refrigerador de - 80 grados y luego pase a un recipiente de nitrógeno líquido para su almacenamiento. Al mismo tiempo, se registra la ubicación del congelador en el contenedor de nitrógeno líquido para su posterior consulta y uso.

Línea celular de adenocarcinoma colorrectal humano resistente a cisbo hct15 / DDP