Células de linfoma de Hodgkin humano HS 611.t

Células de linfoma de Hodgkin humanoHs 611.T

Introducción:HS 611.t células de linfoma de Hodgkin humano llegan al tejido linfático de una mujer de 48 años con enfermedad de hodgkin. Parte de la línea celular nbl. La línea celular es producida o caracterizada por atcc. No garantizamos que mantenga una forma específica, pureza u otras características después de la transmisión.

Número de artículo:WS-S14667

especificación:Vial de cultivo de 1 × 10 células / t25

I. información básica de la célula

- origen celular: ganglios linfáticos

- morfología celular: linfoblastoide, crecimiento pegado a la pared, crecimiento suspendido

- contenido celular: > 1 × 10 células / vial

- especificaciones de embalaje: botella de cultivo t25 / criodepósito de 1 ml

- uso del producto: solo para uso científico,No se puede usar como producto terapéutico para enfermedades animales o humanas.

II. medios de cultivo y condiciones de cultivo

1. medios de cultivo

Medio de cultivo dmem; 10% suero bovino fetal; 1% doble resistencia

Suero recomendado:WinSera FBS500 - WP-002

2. condiciones de cultivo

- fase gaseosa: 95% de aire + 5% de temperatura de co2: 37 ° c; Humedad de la incubadora: 70% - 80%

3. almacenamiento congelado y almacenamiento

- liofilizado: 90% suero bovino fetal + 10% Dmso (ahora disponible)

- condiciones de almacenamiento: conservación a largo plazo del nitrógeno líquido

En segundo lugar, Reglas detalladas para el tratamiento de las células a temperatura ambiente el día de la recepción

Paso: recepción e Inspección

· pasos 1 y 2 de la parte Ejecutiva (proceso general).

Paso 2: cambiar el medio de cultivo y la recolección celular

· detrás de la botella de desinfección, abra la tapa de la botella en la Mesa de trabajo súper limpia.

· reemplazar por un medio de cultivo regalado con la mercancía.

· especial atención: si se encuentra más suspensión celular bajo el microscopio, es necesario transferir todos los medios de cultivo en el frasco a un tubo centrífuga estéril, centrifugar (por ejemplo, 1200 rpm, 5 min) para recoger las células y abandonar el medio antiguo.

· después de completar el reemplazo o la recogida, coloque el frasco de cultivo en la incubadora y continúe reposando durante 2 - 3 horas.

Paso 3: postprocesamiento en reposo (según la densidad celular)

En tercer lugar, Pasos de la operación de transmisión celular

A. paso de células adherentes

1. preparación: absorber y abandonar el medio de cultivo antiguo.

2. enjuagar: añadir lentamente PBS y otros enjuagues a lo largo de la pared lateral del frasco de cultivo, sacudirlos suavemente y absorberlos para eliminar el suero residual.

3. digestión: agregue la enzima Yi precalentada (como t25 más 1 ml) y agite suavemente para que la enzima Yi cubra todas las células.

4. incubación: digestión a temperatura ambiente durante unos 2 minutos (el tiempo varía de una célula a otra).

5. observación: observar bajo un microscopio hasta que ≥ 90% de las células se redondeen y se caigan. Si no se alcanza, se puede comprobar cada 30 segundos.

6. terminación: cuando la célula se disuelve completamente, se añade inmediatamente un medio de cultivo precalentado que duplica el volumen de la enzima Yi para terminar la digestión.

7. soplar: soplar suavemente la pared de la botella con una pipeta para que las células se desprendan y se dispersen en suspensión unicelular.

8. centrifugación: transferir la suspensión celular a un tubo centrífuga, centrifugar 200 × G durante 3 - 5 minutos y descartar el sobrenadante.

9. suspensión pesada e inoculación: precipitación de células de suspensión pesada con una pequeña cantidad de medio de cultivo fresco, diluida en la proporción adecuada, inoculada en un nuevo frasco de cultivo.

10. cultivo: poner en la incubadora. Si se utiliza una tapa normal, asegúrese de aflojar la tapa para facilitar el intercambio de gas.

B. transmisión de células suspendidas

1. recogida y centrifugación: transferir toda la suspensión celular a un tubo centrífuga, centrifugar a 1000 RPM durante 5 minutos y descartar el sobrenadante.

2. suspensión pesada: añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo fresco y suspender suavemente las células.

3. vacunación: pasar la suspensión celular al nuevo frasco de cultivo t25 en una proporción de 1: 2 y complementar el medio total a 5 - 8 ML.

4. cultivo: poner en la incubadora para continuar el cultivo.

4, Manejo de problemas especiales: células adherentes que se desprenden durante el transporte

Algunas células que no están bien adheridas se caerán durante el transporte, lo cual es normal, siga los siguientes pasos:

1. recogida: transferir todos los medios de cultivo de la botella a un tubo centrífuga estéril y centrifugar (1200 rpm, 3 - 5 min) para descartarlo.

2. limpieza: suspensión de células con pbs, centrifugación nuevamente (1200 rpm, 3 - 5 min) para descartar el pbs.

3. digestión: añadir aproximadamente 1 ml de 0,25% de enzima yi, mezclar suavemente (no soplar violentamente) y colocarlo en una incubadora para digerir durante 1 - 2 minutos.

4. terminación y dispersión: después de la extracción, soplar suavemente para dispersar la masa celular, agregar rápidamente 3 - 5 ml de medio de cultivo para terminar la digestión y centrifugar (1200 rpm, 3 - 5 min) para descartar el sobrenadante.

5. suspensión pesada e inoculación: añadir 5 ml de medio de cultivo para suspensión pesada e inocular proporcionalmente en un nuevo frasco / placa de petri.

6. observación: Observación bajo el espejo. Si la célula es una sola o una pequeña masa de solo 3 - 5 células, se puede cultivar normalmente y esperar a que crezca pegado a la pared. - -

V, Resumen de la política de servicio post - venta

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