Células HT - 29 de cáncer de colon humano

Nombre del producto:Células HT - 29 de cáncer de colon humano

Marca: Shanghai yanzun Biology
Número de células: 1x10,6 células
Vitalidad celular: 95% (vility by trypan Blue exclusion)
Transmisión celular: transmisión de 1: 4 a 1: 6; Cambiar de líquido 2 a 3 veces a la semana
Condiciones de crecimiento: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%; Temperatura: 37 ° C
Detección celular: las células no contienen VIH - 1, hepatitis b, hepatitis c, micoplasma, bacterias, levadura y hongos
Condiciones de cultivo: dmem (alto contenido de azúcar) + 10% FBS + 1% P / s; 37 ° c, 5% CO2
Método de transmisión: se recomienda cambiar de líquido una vez cada dos días de 1: 2 - 1: 3
Condiciones de criopreservación: Criopreservación de células libres de suero
Condiciones de congelación: 90% FBS + 10% Dmso
Criopreservación celular: Criopreservación de nitrógeno líquido

Las células llegan al reprocesamiento

Las células se cultivan en el frasco de cultivo en buenas condiciones y se llenan con el medio de cultivo y se sella la boca del frasco es el método de transporte celular. Después de recibir la célula de vuelta a su laboratorio, primero abra el embalaje exterior y useRociar toda la botella con alcohol al 75% para desinfectarla y ponerla en una mesa súper limpia, con una operación estricta y estéril.，Incubadora en reposo2 - 4 horas. Observación bajo el espejo: no superadoAl 80% de confluencia, se puede embotellar el medio de cultivoRecogida en el tubo centrífugaEn, se une6 ml de medio de cultivo, poner37Cultivo en incubadora de CO2 a ° C y 5%; Cuando se supera el 80% de la confluencia, se transmite o congela de acuerdo con la situación, y la operación específica se ve en los pasos de cultivo celular.（Preste atención a que si se envía una botella de cultivo sellada, póngala en la Caja de cultivo para cultivar y recuerde que la tapa de la botella de cultivo se afloja. después de pasar, se recomienda que una botella use el medio de cultivo en la botella original y la otra botella use el medio de cultivo que ha asignado.(...)

Células HT - 29 de cáncer de colon humanoPasos de cultivo

I,Células de reanimación: contendráEl criodepósito de 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se agregó un medio de cultivo de 5 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 5 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y reponer4 - 6mlSopla bien después del medio de cultivo. A continuación, añadir todas las suspensiones celulares al frasco de cultivo para cultivar durante la noche (o añadir las suspensiones celulares)En una placa de Petri de 6 cm(...), cultivar durante la noche. Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.

En segundo lugar,Transmisión celular: si la densidad celular alcanzaEntre el 80% y el 90%, se puede llevar a cabo el cultivo de transmisión.

a)Para las células adherentes, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. más1 -2 ml de líquido digestivo (0.25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) en frascos de cultivo, digeridos en una incubadora a 37 ° C1-2 minutosDespués de observar la digestión de la célula bajo el microscopio, si la mayoría de la célula se redondea y se cae, se devuelve rápidamente a la Mesa de operaciones, se golpea suavemente el frasco de cultivo y se agregaMás de 5 mlIncluyendo10% de sueroEl medio de cultivo termina la digestión.

3. soplar suavemente las células, extraerlas después de caerse, centrifugarlas durante 8 - 10 minutos en condiciones de 1000rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2ml de medio de cultivo y soplarlo bien.

4. presione5 - 6Ml / botella con medio de cultivo complementario, la suspensión celular se distribuye a un nuevo contenido en una proporción de 1: 2.5 - 6En una nueva placa de Petri o en una botella de ml de medio de cultivo.

b),paraSuspensiónLas células, de paso, pueden referirse a los siguientes métodos:

Método 1: recoger células,Centrifugar durante 8 - 10 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido claro, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplarlo bien, y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.

Método 2: se puede elegir el método de cambio de medio. después de descartar la mitad del medio de cultivo, se suspenden las células restantes y se presiona la suspensión celular.La proporción de 1: 2 a 1: 3 se divide en una nueva placa de Petri o botella que contiene 8 ml de medio de cultivo.

PS:Si el cliente recibeCélulas tubulares de 2 ml, después de recibir las células, rocíe todo el tubo con un 75% de alcohol para desinfectarlo y póngalo en una mesa súper limpia o en un Gabinete de seguridad, con una operación estricta y estéril; Transferir células tubulares a frascos de cultivo t25 o6Placa de Petri cm, añadir5Mezcle bien el medio de cultivo de unos ML y póngalo en la incubadora durante la noche para ver la densidad celular: si la densidad no supera80%, cambiar el líquido para continuar el cultivo, transmitirlo o congelarlo según sea el caso. Si la densidad supera80%, se puede transmitir directamente (el método es el mismo que el anterior).

En tercer lugar,Criopreservación celular:（Nota: para el método de Criopreservación de células en Criopreservación sin suero, consulte nuestra empresa.(...)

1、Las células crecen hasta cubrir el frasco de cultivoAl 80% del área, abandone el medio de cultivo en el frasco de cultivo de 25 cm 2 y limpie las células con PBS una vez;

2、AñadirEl 0,25% del líquido digestivo se vierte en aproximadamente 1 ML en el frasco de cultivo, se observa bajo un microscopio invertido, se añade el medio de cultivo para terminar la digestión después de que la célula se encoge y se redondea, se sopla suavemente la célula para que se desprenda, y luego se transfiere la suspensión a un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugado a 1000 RPM durante 5 minutos;

3、Suspender las células con una cantidad adecuada de liofilizado y colocarlas en un tubo de liofilización;

4、Primero coloque el criodepósito celular en- 20 ° c 1,5h y luego trasladarlo a - 80 ° C

Algunas células relacionadas son las siguientes: