Células de adenocarcinoma de endometrio humano HEC - 1 - B

Nombre del producto:Células de adenocarcinoma de endometrio humano HEC - 1 - B

Marca: Shanghai yanzun Biology
Número de células: 1x10,6 células
Vitalidad celular: 95% (vility by trypan Blue exclusion)
Transmisión celular: transmisión de 1: 4 a 1: 6; Cambiar de líquido 2 a 3 veces a la semana
Condiciones de crecimiento: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%; Temperatura: 37 ° C
Detección celular: las células no contienen VIH - 1, hepatitis b, hepatitis c, micoplasma, bacterias, levadura y hongos
Condiciones de cultivo: dmem (alto contenido de azúcar) + 10% FBS + 1% P / s; 37 ° c, 5% CO2
Método de transmisión: se recomienda cambiar de líquido una vez cada dos días de 1: 2 - 1: 3
Condiciones de criopreservación: Criopreservación de células libres de suero
Condiciones de congelación: 90% FBS + 10% Dmso
Criopreservación celular: Criopreservación de nitrógeno líquido

Las células llegan al reprocesamiento

Las células se cultivan en el frasco de cultivo en buenas condiciones y se llenan con el medio de cultivo y se sella la boca del frasco es el método de transporte celular. Después de recibir la célula de vuelta a su laboratorio, primero abra el embalaje exterior y useRociar toda la botella con alcohol al 75% para desinfectarla y ponerla en una mesa súper limpia, con una operación estricta y estéril., la incubadora está tranquila2 - 4 horas. Observación bajo el espejo: no superadoAl 80% de confluencia, se puede embotellar el medio de cultivoRecoger en el tubo centrífuga y añadir6 ml de medio de cultivo, ponerCultivo en incubadoras de CO2 a 37 ° C y 5%; Cuando se supera el 80% de la confluencia, se transmite o congela de acuerdo con la situación, y la operación específica se ve en los pasos de cultivo celular.（Preste atención a que si se envía una botella de cultivo sellada, póngala en la Caja de cultivo para cultivar y recuerde que la tapa de la botella de cultivo se afloja. después de pasar, se recomienda que una botella use el medio de cultivo en la botella original y la otra botella use el medio de cultivo que ha asignado.(...)

Células de adenocarcinoma de endometrio humano HEC - 1 - BPasos de cultivo

I,Células de reanimación: contendráEl criodepósito de 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se agregó un medio de cultivo de 5 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 5 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y reponerSoplar bien después del medio de cultivo de 4 - 6 ML. A continuación, añadir todas las suspensiones celulares al frasco de cultivo para cultivar durante la noche (o añadir las suspensiones celulares)En una placa de Petri de 6 cm) cultivo durante la noche. Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.

En segundo lugar,Transmisión celular: si la densidad celular alcanzaEntre el 80% y el 90%, se puede llevar a cabo el cultivo de transmisión.

a）、 Para las células adherentes, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

1. abandone el sobrenadante de cultivo y lave las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

2. añadir 1 - 2 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) al frasco de cultivo, colocarlo en una incubadora a 37 ° C para digerir 1 - 2 min, y luego observar la digestión celular bajo un microscopio. si la mayoría de las células se redondean y se caen, retire rápidamente la Mesa de operaciones, golpee ligeramente el frasco de cultivo y agregueMás de 5 mlIncluyendo10% de sueroEl medio de cultivo termina la digestión.

3. soplar suavemente las células, extraerlas después de caerse, centrifugarlas durante 8 - 10 minutos en condiciones de 1000rpm, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2ml de medio de cultivo y soplarlo bien.

4. dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 5 - 6 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2, según el medio de cultivo complementario de 5 - 6 ml / botella.

b）、 Para las células suspendidas, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:

Método 1: recoger las células, centrifugar durante 8 - 10 minutos a 1000 rpm, abandonar el líquido claro, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien, y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contiene 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.

Método 2: se puede elegir el método de cambio de medio. después de descartar la mitad del medio de cultivo, las células restantes se cuelgan y la suspensión celular se divide en una nueva placa de Petri o botella que contiene 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 3.

PS:Si el cliente recibeCélulas tubulares de 2 ml, después de recibir las células, rocíe todo el tubo con un 75% de alcohol para desinfectarlo y póngalo en una mesa súper limpia o en un Gabinete de seguridad, con una operación estricta y estéril; Transferir células tubulares a frascos de cultivo t25 oPlaca de Petri de 6 cm, añadir alrededor de 5 ml de medio de cultivo y mezclar bien, poner en la Caja de cultivo durante la noche para comprobar la densidad celular: si la densidad no supera el 80%, cambiar el líquido para continuar el cultivo, pasar de generación en generación o congelar según sea necesario. Si la densidad supera el 80%, se puede transmitir directamente (el método es el mismo que el anterior).

En tercer lugar,Criopreservación celular:(nota: para el método de Criopreservación de células en Criopreservación sin suero, consulte nuestra empresa)

1. las células crecen hasta cubrir el frasco de cultivoAl 80% del área, abandone el medio de cultivo en el frasco de cultivo de 25 cm 2 y limpie las células con PBS una vez;

2. añadirEl 0,25% del líquido digestivo se vierte en aproximadamente 1 ML en el frasco de cultivo, se observa bajo un microscopio invertido, se añade el medio de cultivo para terminar la digestión después de que la célula se encoge y se redondea, se sopla suavemente la célula para que se desprenda, y luego se transfiere la suspensión a un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugado a 1000 RPM durante 5 minutos;

3. suspender las células con una cantidad adecuada de Criopreservación y colocarlas en un tubo de criopreservación;

4. primero coloque el criodepósito celular en- 20 ° c 1,5h y luego trasladarlo a - 80 ° C

Algunas células relacionadas son las siguientes: