Akr (células de cáncer de esófago de ratón)

Akr (células de cáncer de esófago de ratón)

II. tratamiento después de la recepción celular

1) después de recibir la célula, el 75% de la pared de la botella de desinfección con alcohol coloca la botella t25 a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora. si se encuentra que la botella de cultivo está rota, hay un derrame de líquido y la célula está contaminada, Póngase en contacto con nosotros a tiempo después de tomar una foto.

2) confirme el Estado de la célula bajo un microscopio 4 o 5x, mientras toma una foto de la célula recién recibida (10 × 20 × cada una) y una foto de la apariencia del frasco de cultivo como base para el Estado de la célula en el momento de la recepción después de la venta.

3) células adherentes:Las células se colocan a temperatura ambiente durante 1 hora y se observan bajo un microscopio el crecimiento y la adherencia de las células, algunas de las cuales se desprenden y se agrupan debido a la vibración durante el transporte expreso.Si se observa la densidad de crecimiento de las células bajo el microscopio por debajo del 60%, se puede eliminar el medio de cultivo de infusión en el frasco de cultivo (si hay células no adheridas que necesitan recuperación centrífuga, se suspende en el frasco de cultivo original), se añade el medio de cultivo completo recién preparado de 6 - 8 ML y se coloca en la Caja de cultivo celular para continuar el cultivo. Si la densidad de crecimiento celular alcanza más del 70% - 80%, la célula puede ser tratada de generación en generación. Durante el proceso de transmisión, si las células que se desprenden debido al transporte de vibraciones necesitan ser recicladas por centrifugación.

4) método de operación de desprendimiento durante el transporte celular: recoger las células caídas y centrifugarlas y abandonarlas para limpiarlas, lavarlas con pbs, centrifugarlas para descartarlas para limpiarlas, agregar 1 ml de enzima Yi en el tubo centrífuga para dispersar y digerir durante unos 20 segundos, añadir un medio de cultivo completo para terminar la digestión y repavimentarlas centrifugadoras, y el resto de las células adheridas a la pared se operan de acuerdo con el método normal de transmisión celular adherida a la pared.

5) nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por un medio de cultivo completo recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones para cultivar células. Se recomienda que el vial de cultivo t25 pase de 1: 2 por primera vez después de recibir la célula.

III. operaciones de cultivo celular

1) células de reanimación: el siguiente tratamiento de Criopreservación de cultivo celular es solo para referencia, y los pasos de operación específicos son principalmente las instrucciones del producto con el envío.

El criodepósito que contenía 1 ml de suspensión celular se agitó rápidamente y se descongeló en un baño de agua a 37 ° c, y se mezcló uniformemente con un medio de cultivo de 4 ML. Centrifugar durante 3 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante y añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo para soplar bien. A continuación, todas las suspensiones celulares se añaden al matraz que contiene el medio adecuado para el cultivo durante la noche (o se añade la suspensión celular a la placa de Petri de 6 cm, se añaden unos 4 ML para jugar con el medio completo y se cultiva durante la noche). El tercer día se cambió el líquido y se examinó la densidad celular.

2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.

A) abandonar el sobrenadante de cultivo y lavar las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio.

B) añadir 1 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,02 ° ta) al frasco de cultivo para que el líquido digestivo se infiltre en todas las células, colocar el frasco de cultivo en una incubadora a 37 ° C para digerir 1 - 3 Min (dependiendo de la digestión celular), y luego observar la digestión celular bajo un microscopio, si la mayoría de Las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones, golpear ligeramente el frasco de cultivo y añadir 2 - 3 ml de medio completo para terminar la digestión.

C) mezclar suavemente y cargar en un tubo centrífuga estéril, centrifugar a 1000 RPM durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplarlo bien.

D) dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 y cultivarla en una incubadora.

Precauciones para la transmisión de células adherentes:

L asegúrese de lavarlo con pbs.

L las células observan varias veces más el tiempo de dominio, no terminan la digestión y luego soplan sin que las células se desprendan básicamente, por lo que las células son más propensas a diferenciarse y morir.

L no siga golpeando las células

3) Criopreservación celular: cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Tomemos como ejemplo las siguientes botellas t25;

A) recoger las células y los medios de cultivo celular, cargarlos en un tubo centrífuga estéril, centrifugarlos durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el sobrenadante, lavarlos una vez con pbs, descartar el PBS y realizar el recuento celular.

B) añadir el criostorio de células libres de suero de acuerdo con el número de células, hacer que la densidad celular sea de 1 × 10 Mu 6 a 1 × 10 Mu 7 / ml, mezclar suavemente, congelar 1 ml de suspensión celular en cada criostorio, prestar atención al criostorio para hacer un buen trabajo de identificación.

C) coloque el tubo de almacenamiento congelado en el refrigerador a - 80 ° C y transfiera al llenado de nitrógeno líquido para su almacenamiento después de 24 horas. Registre la ubicación del congelador para recogerlo la próxima vez.

IV. precauciones de capacitación

1) problemas con las células y repetición

A) diversos problemas encontrados durante el transporte de células, pérdida de células, rotura del cuerpo de la botella, fugas graves de líquido de cultivo, etc., recurrentes;

B) el problema de la contaminación celular, por favor, danos los resultados reales del experimento dentro de los 3 días siguientes a la recepción del producto y vuelva a enviarlo después de la verificación;

C) después de dos horas de reposo de las células enviadas a temperatura ambiente, dos días después de la reanimación de las células enviadas por liofilización de hielo seco, la gran mayoría de las células no sobrevivieron, (es necesario proporcionar fotos reales y claras del Estado celular), reedición;

D) dos días después de la recuperación de las células enviadas por liofilización de hielo seco o a temperatura ambiente, las células enviadas se mantienen estáticas durante 2 horas y no se abren, aparecen contaminantes y se repiten;

E) cuestión de la actividad celular, por favor, danos los resultados reales del experimento dentro de los 7 días siguientes a la recepción del producto, identifique la vitalidad celular con el método de Tinción azul de esperanza, y tome fotos celulares diarias, que se reeditarán después de la verificación;

F) por favor, tome fotos el día de la recepción de la célula y el día 2 y 3, y si no se informa durante 3 días, se considerará que el producto está calificado. Si hay un problema dentro de los 4 - 7 días, se debe proporcionar una foto de los 3 días anteriores a la recepción de la célula y una foto del problema de la célula, así como los pasos detallados de las operaciones relacionadas con la célula, y si se comunica con el técnico, el técnico decidirá que somos responsables, se reeditará.

2) situaciones en las que las células tienen problemas y no se repiten

A) las operaciones del cliente causan contaminación celular y no se repiten;

B) los graves errores operativos del cliente causan un mal estado celular y no se repiten;

C) el Estado celular causado por el sistema de cultivo celular no recomendado por nosotros no es bueno y no se repite;

D) el Estado celular no es bueno, no se proporcionan fotos reales y claras del Estado celular tres días antes del cultivo, no se reeditan;

E) no se repetirán los problemas celulares causados por otros tratamientos durante el cultivo celular;

F) si el tiempo de recepción de la célula y descubrimiento del problema para comunicarse con el personal de servicio al cliente es superior a 7 días, no se repetirá;

G) según el caso.

V. precauciones

1. todas las células animales se consideran potencialmente dañinas para la biología y deben operar en la Plataforma de bioseguridad secundaria. preste atención a la protección. todos los residuos líquidos y utensilios que han estado en contacto con esta célula deben ser esterilizados antes de que puedan ser desechados.

2. se recomienda usar siempre guantes protectores, ropa y máscaras protectoras al reanimar las células congeladas. Nota: el congelador Se filtrará cuando se sumerja en nitrógeno líquido y se llenará lentamente de nitrógeno líquido. Al descongelarse, la conversión del nitrógeno líquido en fase gaseosa puede provocar la explosión del recipiente o soplar su tapa con fuerzas peligrosas, produciendo así escombros voladores que causan daños humanos.

¡3. ¡ la célula es solo para investigación científica! ¡¡ las instrucciones son solo para referencia, sujeto a las instrucciones de llegada reales!