Medio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales()HuMSC sin suero medio(...)

Descripción del producto

Medio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesEs un producto de cultivo de células madre mesenquimales del cordón umbilical humano sin suero y sin ingredientes de origen animal. los ingredientes principales son: aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas, albúmina, transferrina, insulina, oligoelementos, citocinas, etc.

Este producto se puede utilizar para el cultivo primario y la transmisión múltiple de células madre mesenquimales, manteniendo al mismo tiempo su potencial de diferenciación multidireccional, como la capacidad de diferenciarse en osteocitos, condrocitos y células grasas, sin necesidad de agregar suero o sustitutos séricos al usarlo.

Información de pedido

Componentes del producto

Transporte y conservación

ComponentesATransporte de hielo azul,4℃ conservar; ComponentesBTransporte de hielo seco,-20Conservar por debajo de ℃. Período de validez12 Meses.

Modo de empleo

1.Preparación del medio de cultivo

取500 mlComponentesA, unirse25 metrosL ComponentesBLa mezcla es uniformeMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales.Nota:Si es necesario, el usuario puede preparar la cantidad necesaria proporcionalmente.

2. Aislamiento y cultivo de células madre mesenquimales primariasT75Botellas de cultivo como ejemplo)

(1) Retire el cordón umbilical, desinfecte la superficie exterior del cordón umbilical y limpie para eliminar las manchas de sangre, Corte en aproximadamente2 cm ~ 4 cmPequeñoBloque, eliminación de arterias y venas, fabricación de lados largos5 mm~ 10 mmTrozos pequeños, colocadosT75El frasco de medio de cultivo está bien organizado,Colocar cada botella15~.20Bloque.Nota:Es necesario distinguir el lado de la piel de la superficie del cordón umbilical del lado del pegamento Huatong para garantizarEl lado del pegamento Huatong se adhiere a la parte inferior del frasco de cultivo.

(2) Voltear el frasco de cultivo y colocarloCO2En la incubadora,37℃Reposo60 minutos.

(3) Retire el frasco de cultivo y agregue lentamente al frasco de cultivo.15 mlMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales, poner 37℃ ,5%CO2 Cultivo en una incubadora.

(4) 第 7Días, cada unoT75El frasco de cultivo se complementa con fresco.Medio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales5 ml.

(5) Después de la rehidratación, cada3Medio cambio de líquido al día, aspirar10 metrosL El medio de cultivo se abandona y se añade10 metrosLFrescodeMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales.

(6) 第13Comienza el día observando bloques de tejido, como bloques de tejidoEl grado de fusión de las células circundantes alcanza90%, se puede recibirCapturar células, de lo contrario continuar cada3El grado de fusión celular alrededor del bloque tisular se alcanza después de un cambio de medio líquido durante el día.90%.

3. Cultivo de células madre mesenquimales y Criopreservación (conT75PeiMantenga la botella como ejemplo)

(1) PonerMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesEquilibrio a temperatura ambiente.

(2) Limpieza: extraer las células, aspirar el medio de cultivo en el frasco de cultivo y descartarlo, cada unoT75Botella de cultivousar10mL~15mLPBSHumedecer las células una vez.

(3) Digestión: añadir 3 mlEl líquido digestivo, después de que el líquido digestivo se infiltre en toda la superficie de crecimiento celular, se coloca en CO2 En la incubadora,37℃Digestión 2 minutos~.6 minutos, Observación microscópica, aproximadamente 80%Cuando las células anteriores se encogen y se redondean y se caen,Añadir el doble de volumenMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesTermina la digestión y sopla para dispersar las células enCélulas individuales, recuento celular.

Nota:Si la mayoría de las células retroceden y se redondean pero no se caen, se puede golpear suavemente la pared del frasco para queSe cae. Si la célula no se cae, puede prolongar el tiempo de digestión.

(4) Recogida:300g,5 minutosLa centrifugadora recoge las células para precipitarse y abandona el sobrenadante.

(5) De generación en generación/.Almacenamiento congelado: si se realiza una operación de transmisión, se utilizaMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesCélulas de suspensión pesada, según la densidad de vacunación adecuada (recomendado8000Células individuales/.cm₂) vacunar las células a las que se han añadido equilibrios a temperatura ambiente20 mlMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesde T75En el frasco de cultivo, póngalo 37℃,5%CO2 Continuar el cultivo en la incubadora.

Si se congelan las células, se tomarán los pasos..4Precipitación de las células recogidas, añadir una cantidad adecuada de células de acuerdo con la densidad de CriopreservaciónEl liofilizado sopla suavemente las células de suspensión pesada y las mezcla bien, se transfiere al congelador celular, que se coloca en el procedimiento para bajar.Caja de temperaturaEn medio,-80℃Pasar la noche,24 horasDespués de eso, se transfiere al nitrógeno líquido para su conservación a largo plazo.

4. Recuperación de células madre mesenquimales (con T75Botellas de cultivo como ejemplo)

(1) PonerMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesEquilibrio a temperatura ambiente, se añade cada botella de cultivo15 ml deMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales.

(2) Extraer las células congeladas y colocarlas 37℃Descongelar rápidamente en la olla de baño de agua.

(3) Absorbe inmediatamente la transferencia de la suspensión celular descongelada 1 mlA 15 ml Tubo centrífugaAñadir gota a gota 4 metrosL Medio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales, mezclar y contar después.

(4) De acuerdo con los resultados del recuento, según la densidad de vacunación adecuada (recomendada) 8000 Células individualespor cm₂) célulasVacunación hasta la adhesión 15 metrosL Medio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesEn un recipiente de cultivo celular.

Nota:Si el liofilizado celular no contiene DMSOQue permite agregar células directamente 20 metrosL Medio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimalesMedio y no hay necesidad de cambiarlo al día siguienteLíquido.

(5) Colocar células en 37℃ ,5% de CO2 Cultivo en una incubadora.

(6) 12 horas~.24 horasDespués de eso, cuando la célula se adhiere normalmente a la pared, abandona el sobrenadante de cultivo y se uneFresco, equilibrado a temperatura ambiente 20 mlMedio de cultivo libre de suero de células madre mesenquimales. Según el Estado de crecimiento celularEstado, cada 3Cambio de líquido al día hasta que el grado de fusión celular alcanza 80%~.90%.

Precauciones

1. Este producto se limita a la investigación experimental científica y no se puede utilizar en diagnóstico clínico, tratamiento y otros campos.

2. Este producto no contiene antibióticos y no se recomienda agregar antibióticos. Si hay que añadir antibióticos, entoncesSe deben optimizar las condiciones de cultivo.

3. Este producto no contiene rojo fenol, no contiene suero ni ingredientes de origen animal, si es necesarioSe puede agregar extra.

4. Para lograr el efecto ideal de cultivo celular, este producto se puede usar directamenteTambién se pueden agregar los factores de crecimiento celular o hormonas necesarios adicionales según el tipo de célula o las necesidades de Investigación.

5. BenproductoEl efecto del cultivo de células puede deberse al origen celular, las condiciones de almacenamiento, las muestrasCalidad, experiencia del operadorHay diferencias en la inspección.

6. El producto debe almacenarse en las condiciones de almacenamiento especificadas y utilizarse durante el período de validez.

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