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Nota: vendidos por la empresaAgente abcam, kit de Elisa del fragmento de complemento humano 5a Kit c5a, solo para experimentos científicos, no para alimentos o clínicos, medicamentos comestibles, etc.
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ELISAPrecauciones experimentales
1.En el momento de la prueba formal, las condiciones de la prueba deben controlarse con control positivo y control negativo, respectivamente, y las muestras a examinar deben hacerse por duplicado para garantizar la precisión de los resultados de la prueba. A veces el Fondo es más alto, lo que indica una respuesta no específica, que se puede utilizar suero de oveja, suero de conejo oBSAEspera el cierre.
2.EnELISAEntre ellos, la elección de las condiciones para realizar varios experimentos es importante, incluyendo:
(1)Selección de portadores sólidos: muchas sustancias se pueden utilizar como portadores sólidos, como cloruro de polivinilo, poliestireno, polipropilamida y celulosa. Su forma puede ser una placa cóncava, un tubo de ensayo, una perla, etc. Lo que se utiliza comúnmente en la actualidad es40Placa cóncava de poliestireno poroso. Independientemente del vector, se puede seleccionar antes de su uso: envuelto en un paquete de antígenos de la misma cantidad, reaccionando en las mismas condiciones experimentales, observando si su reacción de color es uniforme, determinando así si su rendimiento de adsorción es bueno.
(2)Anticuerpos envueltos(O antígenos(...)Elección: anticuerpos(O antígenos(...)Cuando se adsorbe en la superficie del portador sólido, se requiere una buena pureza.,Requisitos generales al absorberPHEn9.0-.9.6Entre. La temperatura de adsorción, el tiempo y su cantidad de proteínas también tienen un cierto impacto.,En general, se utilizan más4℃18-.24Horas. La concentración adecuada del sobre de proteínas debe titularse: es decir, con diferentes concentraciones de proteínas(0.1、1.0y10μg/.mlesperar(...)Después de realizar el paquete, se observan especímenes positivos en las mismas condiciones de otras pruebas.ODValor. elecciónODvalorConcentración de Zui grande y con poca cantidad de proteína. Para la mayoría de las proteínas suele ser1-.10μg/.ml.
(3)Selección de la concentración de trabajo de los anticuerpos marcados enzimáticamente: primero con directoELISAEl método realiza la titulación del título preliminar.(Ver la parte de anticuerpos marcados con enzimas(...). Luego fijar otras condiciones o tomar“Método de matriz cuadrada",(Los recubrimientos, los materiales de referencia de las muestras a detectar y los anticuerpos marcados con enzimas tienen diferentes diluciones.(...)La concentración de su trabajo se titula con precisión en el sistema experimental formal.
(4)Sustrato de la enzima y selección del donante de hidrógeno: el requisito de selección del donante de hidrógeno es una reacción de color barata, segura y obvia, mientras que el propio donante de hidrógeno es incoloro. Algunos donantes de hidrógeno(comoOPDesperar(...)Tiene un potencial efecto cancerígeno y se debe prestar atención a la protección. Aquellos que estén en condiciones deben usar donantes de hidrógeno no cancerígenos y altamente sensibles, comoTMByABTSEs un proveedor de hidrógeno más satisfactorio en la actualidad. Después de un período de acción del sustrato, se debe agregar un ácido fuerte o una base fuerte para detener la reacción. Por lo general, el tiempo de acción del sustrato es10 - 30Los minutos son adecuados. El líquido de uso del sustrato debe prepararse fresco, especialmenteH2O2Únete antes de usar temporalmente.