Viales de detección rápida microbiana: diagnóstico

　　Detección Rápida MicrobialViales: Diagnóstico

1. ¿Además de detectar bacterias viables, los viales de detección microbiana también pueden detectar bacterias muertas?

Respuesta: No, no pueden detectar bacterias muertas.

2. ¿Pueden los viales de detección microbiana detectar bacterias anaeróbicas?

Respuesta: El rango de detección de estos viales abarca tanto bacterias anaeróbicas (como Clostridia y *Clostridium perfringens*) como bacterias aeróbicas.

Los reactivos contenidos dentro de los viales de detección varían dependiendo del tipo específico de microorganismo dirigido. Para las bacterias anaeróbicas, como Clostridium perfringens, utilizamos reactivos especializados.

3. ¿Qué métodos de detección específicos se emplean en los principios de detección de estos viales?

Respuesta: Métodos basados en cultivos, métodos enzimáticos, métodos inmunológicos y métodos genéticos.

4. Con respecto a la pregunta 3, ¿podría describir brevemente las ventajas y desventajas de cada uno de estos métodos?

Respuesta: A diferencia de los métodos tradicionales de medios de cultivo, los análisis de oro coloidal, los inmunoensayos enzimáticos o los métodos de PCR, cuando se usan en aislamiento, el sistema de detección microbiana alemán representa una integración integral de múltiples técnicas. El uso de cualquier método de detección único presenta inconvenientes inherentes; por ejemplo:

Los métodos de PCR requieren personal técnico especializado y equipo caro;

Los métodos de medios culturales implican procedimientos operacionales complejos;

Los ensayos de oro coloidal sufren de baja sensibilidad;

Los inmunoensayos enzimáticos pueden carecer de suficiente especificidad en la captura diana.

La serie alemana de viales de detección rápida de microbios representa una aplicación sinérgica de los métodos anteriormente mencionados, aprovechando eficazmente los puntos fuertes de cada técnica mientras compensa sus respectivas limitaciones.

5. ¿Al realizar la detección microbiana utilizando estos viales, la muestra debe añadirse primero, o el agua estéril?

Respuesta: Cualquier orden es aceptable. 6. ¿Es necesario realizar la inoculación microbiana de la muestra en un entorno estéril?

Respuesta: La botella de detección funciona capturando objetivos específicos y utilizando una combinación de métodos analíticos. Por lo tanto, no se requiere estrictamente un entorno estéril (la mayoría de los sitios de pruebas clínicas son, de hecho, entornos no estériles).

7. ¿Se puede usar la botella de detección para probar muestras de superficie y muestras sólidas?

Respuesta: Sí, puede probar muestras sólidas, líquidas y superficiales (para muestras superficiales, use el hisopo proporcionado humedecido con agua estéril para hisopar la superficie). También se pueden probar muestras como pasta, semisólidas o viscosas, como la pasta de papel.

8. Al probar muestras sólidas con la botella de detección, ¿se requiere algún pretratamiento, como molienda o dilución?

Respuesta: No; simplemente colocar la muestra directamente en la botella de detección sin ningún procesamiento previo.

9. ¿Cuánto agua estéril se requiere para cada prueba?

Respuesta: Generalmente, 11 ml. Si se prueban muestras líquidas o muestras de agua, se recomienda añadir 1 ml de la muestra y 10 ml de agua estéril.

10. Después de agregar la muestra y el agua estéril, ¿es el paso de "agitar para asegurar la disolución completa y la mezcla" un procedimiento obligatorio tanto para el análisis cualitativo como cuantitativo?

Respuesta: Sí, agitar para mezclar es un paso obligatorio tanto para el análisis cualitativo como cuantitativo.

11. ¿Los diferentes microorganismos requieren la misma temperatura de incubación? Por favor, proporcione ejemplos.

Respuesta: No, no lo hacen. La mayoría de los microorganismos requieren 37 ° C, como el recuento total viable, Salmonella y Listeria, mientras que otros, como E. coli, requieren 44 ° C.

12. Si muestras de prueba como platos fríos o helados, ¿la incubación debe llevarse a cabo a una temperatura más baja? Respuesta: No hay restricciones con respecto a la temperatura de la propia muestra. Sin embargo, al realizar pruebas de microorganismos dentro de la muestra, debe adherirse estrictamente a la temperatura de incubación específica correspondiente al microorganismo objetivo, como se indica en la tabla de referencia.

13. Si deseo acelerar el proceso de ensayo, ¿puedo establecer la temperatura de incubación más alta que la temperatura especificada para el microorganismo objetivo?

Respuesta: No. Debe adherirse estrictamente a la tabla de referencia.

14. ¿Cuál es el volumen/peso de la muestra especificado requerido por el manual de operación?

Respuesta: 0,1 g – 1,0 g o 0,1 mL – 1,0 mL.

15. ¿Si el volumen/peso real de la muestra supera el límite especificado, los resultados de la prueba diferirán? Específicamente, ¿los resultados (en el caso del análisis cuantitativo) parecerán artificialmente elevados?

Respuesta: Si el volumen/peso de la muestra es ligeramente superior o inferior al especificado, los resultados del análisis cuantitativo no se verán afectados.

Los métodos de prueba microbiológicas tradicionales, incluidos los métodos de referencia establecidos (como el conteo de colonias en medios selectivos sólidos), exhiben una "dispersión estadística" inherente superior al 50%. (La dispersión estadística, también conocida como variabilidad estadística, se refiere a la propagación de una distribución variable o de probabilidad; ejemplos comunes incluyen varianza, desviación estándar y intervalo intercuartil.) Numerosos laboratorios han confirmado que los métodos de detección biológica demuestran una dispersión estadística menor y una mayor fiabilidad en comparación con otras metodologías de prueba. Sin embargo, una dispersión estadística del 25-30% sigue siendo inherente al proceso. Además, también debe tenerse en cuenta la dispersión estadística introducida durante la etapa de muestreo, especialmente en el caso de los productos alimenticios sólidos (como los productos cárnicos), donde los microorganismos proliferan con frecuencia.

En consecuencia, los resultados obtenidos de la adición de una muestra de 0,5 g son estadísticamente equivalentes a los obtenidos de la adición de 1,5 g (y son equivalentes a los resultados obtenidos usando cualquier otro método de ensayo).

16. ¿Se pueden ensayar muestras de baja densidad y de relleno suelto, como la harina, utilizando el procedimiento estándar?

Respuesta: Sí, pueden. 17. Para muestras de color oscuro como la salsa de soja, ¿interferirá el color con la interpretación de los resultados cualitativos de las pruebas? ¿Tienes alguna recomendación?

Respuesta: Si se utiliza un instrumento de detección para el análisis cuantitativo, este problema no surge. Sin embargo, si está realizando análisis cualitativos únicamente observando visualmente los cambios de color:

Para muestras de color oscuro, si le preocupa que el cambio de color no sea claramente discernible a simple vista, recomendamos diluir la muestra antes de la prueba. ¿Recuerdas la respuesta a la pregunta 15? Los resultados obtenidos añadiendo 0,5 g o 1,5 g de muestra son estadísticamente equivalentes (y comparables con los resultados obtenidos a través de cualquier otro método).

El mismo principio se aplica a la dilución.

18. Si prueba una muestra de agua, ¿es todavía necesario añadir agua estéril? Si es así, ¿cuánto?

Respuesta: Recomendamos añadir 1 ml de la muestra de agua y 10 ml de agua estéril.

19. ¿Los diferentes microorganismos presentan el mismo color inicial y el mismo color de resultado positivo? Por favor, proporcione ejemplos.

Respuesta: No, son diferentes.

Por ejemplo, después de incubar durante aproximadamente 10 minutos, *Salmonella* típicamente presenta un color inicial de rojo, con un resultado positivo indicado por amarillo. *Listeria*, por otro lado, presenta un color inicial de azul, con un resultado positivo indicado por amarillo. Por favor, consulte el gráfico de referencia para obtener detalles específicos.

20. ¿Funciona el instrumento de detección microbiana también como incubadora?

Respuesta: Sí. Después de agitar a fondo la botella de detección, colocarla inmediatamente en el instrumento de detección. Una vez que haya configurado los ajustes específicos de microorganismos dentro del software,

el instrumento realizará automáticamente el proceso de incubación y generará un informe de análisis cuantitativo.

21. ¿Funciona el instrumento de detección microbiana también como agitador/oscilador?

Respuesta: No, no lo hace. Debe agitar manualmente la botella vigorosamente durante 2-3 minutos, o usar un agitador mecánico durante aproximadamente 20 segundos, hasta que el contenido se disuelva completamente o se mezcle a fondo.

22. ¿Cuál es el principio subyacente de la interpretación de los resultados del instrumento de detección de microbios? Respuesta: El instrumento de detección microbiana es un lector óptico de precisión. Utilizando principios ópticos, detecta con precisión cambios de color dentro de los viales de detección y genera informes de análisis cuantitativos precisos.

23. ¿El instrumento de detección de microbios funciona con una fuente de alimentación externa o tiene una batería recargable incorporada?

Respuesta: Funciona con una fuente de alimentación externa.

24. ¿Cuántas botellas de detección puede analizar el detector microbiano simultáneamente e independientemente?

Respuesta: 8 botellas. Realiza una detección simultánea e independiente, generando un informe de análisis cuantitativo separado para cada botella.

25. ¿Es necesario instalar un software de análisis en un ordenador para realizar análisis cuantitativos utilizando el detector microbiano?

Respuesta: Sí, debe instalar el software de análisis que lo acompaña.

26. ¿Qué sistemas operativos informáticos son compatibles con este software de análisis?

Respuesta: XP, Vista y Windows 7.

27. Si el detector se está encendiendo por primera vez, ¿cuánto tiempo debe esperarse después de conectar la fuente de alimentación antes de proceder con el siguiente paso?

Respuesta: Si se enciende por primera vez, es aconsejable esperar aproximadamente 40 segundos después del arranque antes de continuar las operaciones.

28. ¿Al realizar un análisis cuantitativo, debe colocarse inmediatamente la botella de detección, después de mezclarla a fondo, en el detector, o debe esperarse un momento antes de insertarla?

Respuesta: Debe colocarse en el detector inmediatamente después de mezclar a fondo.

Una vez que se ha colocado una botella de detección en el detector, ¿de qué color se activará la luz indicadora correspondiente a ese puerto de detección en la interfaz del software después de hacer clic en "Inicio" en el software de análisis?

Respuesta: Después de hacer clic en "Inicio" en la interfaz correspondiente a la botella de detección específica, la luz indicadora para ese puerto cambiará de verde a rojo, lo que indica que el proceso de detección ha comenzado y está actualmente en curso.

30. ¿A qué color volverá la luz indicadora correspondiente a ese puerto en la interfaz del software de análisis, señalando que la prueba ha terminado y se puede insertar una nueva muestra?

Respuesta: Mientras la detección está en curso, la luz indicadora permanece roja. Una vez que la detección está completa, la luz indicadora se vuelve verde. En este punto, es permitido insertar una nueva botella de detección en el puerto correspondiente del detector para comenzar la siguiente ronda de pruebas. La duración del proceso de detección se determina ya sea por la cantidad real de bacterias presentes (en casos de alto contenido microbiano) o por la duración correspondiente especificada en el gráfico de referencia (en casos de contenido microbiano muy bajo, donde la duración de la prueba debe exceder el tiempo requerido para detectar 1 UCF como se indica en el gráfico). 31. ¿Cuál es la relación entre el tiempo de análisis requerido para una botella de detección microbiana y el contenido microbiano dentro de esa botella?

Respuesta: Es una relación inversa. Es decir, cuanto mayor sea el contenido microbiano, menor será el tiempo de detección correspondiente; al contrario, cuanto menor sea el contenido microbiano, mayor será el tiempo de detección correspondiente.

Si el contenido microbiano en una muestra es excesivamente alto, los resultados del análisis cuantitativo mostrados por el detector mostrarán fluctuaciones significativas en solo unos minutos o incluso segundos.

Si el contenido microbiano es muy bajo (dado que el RVLM es un instrumento altamente preciso y sensible), un usuario experimentado puede, mediante la observación de cambios de datos durante un período de varias horas (o incluso solo unos minutos), hacer una determinación preliminar en cuanto a si el contenido microbiano objetivo cumple con los requisitos especificados.

32. ¿Antes de llevar a cabo un análisis, debería establecerse un objetivo experimental claro para definir el contenido microbiano específico que se destine a la detección (específicamente, los límites microbianos admisibles estipulados por las normas nacionales)?

Respuesta: Es altamente recomendable.

Por ejemplo, tanto las normas nacionales (como la serie GB) como las normas internacionales (como la serie CE) especifican explícitamente (o semiexplícitamente) los niveles máximos permitidos de presencia microbiana en varios productos de aves de corral y ganado.

Más específicamente, al realizar la detección microbiana, el primer paso es definir claramente el objetivo del análisis. Por ejemplo, la norma internacional EC 2073:2005 estipula que el nivel máximo permitido de *E. coli* en la carne fresca es de 102 UCF/g, lo que significa que el contenido de *E. coli* por gramo de carne fresca no debe exceder de 102 UCF. En este escenario, consultando la tabla de referencia, localizamos la columna correspondiente a *E. coli* y encontramos el valor log(10² CFU) = 2. Seguimos este valor (2) dentro de la fila de E. coli hasta la primera columna, donde encontramos que el número correspondiente es 14. En consecuencia, ya sea que se realice un análisis cualitativo a través de una inspección visual o un análisis cuantitativo utilizando el detector, se puede obtener un resultado analítico estrictamente preciso con respecto a si el contenido de E. coli en la muestra supera los 102 UCF dentro de un período máximo de 14 horas. Si se utiliza una botella de detección para el análisis cuantitativo, un técnico de laboratorio experimentado puede, en un plazo muy corto (por ejemplo, aproximadamente de diez a quince minutos), realizar una evaluación preliminar del contenido microbiano dentro de la botella basándose en los cambios dinámicos observados en los datos del análisis cuantitativo.

33. ¿Cuál es el objetivo específico de las pruebas de contenido microbiano y qué función desempeña el gráfico de referencia?

Respuesta: Sirve como base para determinar los parámetros de referencia estándar, específicamente la temperatura de incubación, el color inicial, la duración del análisis y el color de resultado positivo, correspondientes al microorganismo específico que se está probando. Para obtener instrucciones detalladas sobre cómo usarlo, consulte la respuesta proporcionada en la pregunta anterior.

34. ¿Qué es una UCF?

Respuesta: CFU significa "unidad formadora de colonias".

Es la abreviatura inglesa para las unidades de agrupaciones microbianas (colonias) obtenidas después del cultivo.

Sirve como unidad de medición para las bacterias (específicamente, las que son visibles) y los hongos. CFU (unidad formadora de colonias) se refiere a un método en el que un volumen específico de suspensión microbiana diluida se extiende o se vierte sobre una placa de agar, permitiendo que las células microbianas individuales se dispersen a través de la superficie. Después de la incubación, cada célula viable se desarrolla en una colonia distinta. A diferencia de los métodos convencionales que utilizan un microscopio para contar células microbianas individuales, el método CFU mide principalmente la cantidad de bacterias *visibles*, es decir, aquellas que forman colonias en condiciones estándar. Esencialmente, indica el número de células microbianas individuales presentes por mililitro de la suspensión. Tradicionalmente, este recuento se refería simplemente como "células individuales" o "recuentos". Sin embargo, sabemos que una sola colonia no es necesariamente generada por una sola bacteria; puede originarse de un grupo de bacterias (un agregado bacteriano). En tales casos, referirse a ellos simplemente como "células individuales" no es del todo preciso; La terminología precisa es "unidad formadora de colonias", abreviada como "CFU". Es análoga a los términos "kilogramo" y "kilo" - son simplemente nombres diferentes para la misma cantidad.

CFU significa "unidades formadoras de colonias". CFU/ml se refiere al número total de colonias bacterianas contenidas por mililitro de muestra; También se utiliza la unidad CFU/g, correspondiente a medios de cultivo sólidos.

Supongamos que necesito ensayar una muestra para determinar si su recuento de coliformes excede de 10^6 UCF/g o 10^6 UCF/ml.

Utilizando la observación visual de los cambios de color dentro de la botella para el análisis cualitativo, describe el procedimiento de detección en detalle haciendo referencia a la "Temperatura de incubación y gráfico de referencia colorimétrica".

Respuesta: Paso 1: Adición de la muestra

Añadir la muestra a ensayar (0,1-1,0 g o 0,1-1,0 ml), luego añadir 11 ml de agua estéril. (Dependiendo de la naturaleza del material de prueba, si es líquido, se recomienda añadir 1 ml de muestra y 10 ml de agua estéril; la diferencia es insignificante.)

Paso 2: Agite la botella hasta que el contenido esté completamente disuelto o mezclado a fondo.

Si se agita manualmente, agitar vigorosamente durante aproximadamente 2-3 minutos; si utiliza un agitador mecánico, agitar durante aproximadamente 20 segundos.

Paso 3: Interpretar los resultados de la prueba en el momento apropiado.

(1) Para el análisis cualitativo visual: Consulte el gráfico de referencia para determinar la temperatura de incubación específica, el color inicial, el tiempo de detección, el color del resultado positivo y otros parámetros correspondientes a los coliformes.

Temperatura de incubación: Según el gráfico de referencia, esta es de 37°C.

Color inicial: se refiere al color que aparece después de que la botella se haya agitado a fondo y se haya colocado en una incubadora a 37°C durante aproximadamente 10 minutos. Según la tabla de referencia, este color es rojo.

Tiempo de detección: Nuestra norma de prueba requiere determinar si el contenido de coliforme supera 10^6 CFU/g o 10^6 CFU/ml. De acuerdo con el gráfico de referencia, localizar la columna correspondiente a log 10^6 = 6; Encontrar la fila correspondiente al número 6. Esto indica un tiempo de detección de 6 horas. Por lo tanto, el tiempo de observación se establece en 6 horas.

Color de resultado positivo: Según el gráfico de referencia, el color que indica un resultado positivo para los coliformes es amarillo. Una vez que se haya confirmado la información necesaria, colocar la botella de ensayo completamente mezclada en una incubadora a temperatura constante a 37°C y dejarla sin perturbaciones. Después de incubar durante aproximadamente 10 minutos, observará que la botella de prueba muestra el color inicial correspondiente a la detección de coliformes: rojo. Continuar la incubación; Si el color se ha vuelto amarillo, esto indica que el contenido de coliformes en la muestra supera 10^6 CFU/g o 10^6 CFU/ml, y la muestra se considera no conforme. Si el color no se vuelve amarillo, pero en cambio permanece en el color rojo inicial o cambia a un tono intermedio, esto indica que el contenido de coliformes en la muestra no excede de 10 ^ 6 CFU / g o 10 ^ 6 CFU / ml, y la muestra se considera conforme.

(2) Si se utiliza un detector para el análisis cuantitativo:

Por favor, consulte la siguiente pregunta para este paso.

Paso 4: Esterilización

Por último, no olvide presionar la parte superior de la tapa de la botella de prueba para esterilizar la botella. Después de presionar la tapa, agite la botella; Ahora es seguro descartarlo.

Nota: Durante los procedimientos experimentales, evite tocar la parte superior de la tapa de la botella de prueba para evitar la esterilización accidental en un momento inapropiado, lo que podría comprometer los resultados de la prueba.

Si la pregunta 34 se realiza conjuntamente con un detector para realizar un análisis cuantitativo preciso, sírvanse proporcionar una descripción detallada de las etapas operacionales.

Respuesta: Si se utiliza un detector para el análisis cuantitativo:

Coloque inmediatamente la botella de prueba completamente mezclada en el detector. Inicie el software del detector y haga clic en "Estación" para introducir la información relevante (incluyendo: nombre del inspector, tipo de prueba, ID de muestra, cliente / fuente, hora de prueba, etc.). En el menú desplegable "Tipo de análisis" de la interfaz del software, seleccione el tipo específico de microorganismo a detectar. Haga clic en "OK", luego haga clic en "Inicio"; la luz indicadora se volverá roja, lo que significa que el dispositivo ha entrado en la fase de análisis. Monitorear los datos de análisis cuantitativos mostrados por el detector para hacer una determinación.

37. ¿Por qué no debe presionarse la tapa de la botella de detección antes de completar la prueba?

Respuesta: Proceso de esterilización. La tapa de la botella contiene un agente esterilizante; presionar la tapa libera este agente en la botella, donde reacciona con el disolvente interno para completar el proceso de esterilización. Por lo tanto, por favor, no toque la tapa de la botella de detección durante el experimento.