◆ 1 - muestreo de microorganismos: debido a que muchos microorganismos pueden repetir su crecimiento en una placa de agar, el primer paso es encontrar las condiciones de cultivo correctas. Utilizando la técnica simple y común de cultivar células en una placa de agar, se puede lograr una preparación conveniente de muestras. Por ejemplo, las bacterias se cultivan primero en cuadrantes de diferentes densidades celulares en una placa de Agar durante 16 - 24 horas, lo que puede obtener resultados muy confiables. Solo se recolectan colonias del tercer cuadrante. El estudio encontró que la clave del éxito del método radica en la estandarización de las condiciones de recolección y la consistencia del crecimiento bacteriano en la placa de agar. También se pueden hacer algunas mejoras (como cambiar al medio líquido o cambiar el tiempo / temperatura de cultivo). Sin embargo, es necesario asegurarse de que todas las mediciones se realicen en las mismas condiciones para obtener resultados confiables.

◆ 2 - técnicas de medición bacteriana: las técnicas utilizadas para la identificación microbiana requieren simplicidad y alta repetibilidad. Cuando la solución microbiana se seca lentamente, las células microbianas producen biopelículas sólidas. Al optimizar este proceso, se obtiene un procedimiento de preparación de muestras fácil de operar y se satisface la repetibilidad necesaria para la medición infrarroja. La luz infrarroja penetra en la Biopelícula y es absorbida por las diferentes partes moleculares presentes en la célula, produciendo huellas químicas únicas de cada cepa medida.

Para la identificación microbiana FT - ir, nuestra mayor preocupación es la precisión de los resultados, cuya clave depende de la calidad de la biblioteca espectral de referencia. La biblioteca espectral de los microorganismos es diferente de la biblioteca espectral general. para garantizar la fiabilidad de los resultados, es necesario establecer una biblioteca espectral sistemática en condiciones estandarizadas.

En primer lugar, es necesario garantizar el cultivo repetible de microorganismos. Los medios de cultivo, las condiciones de cultivo (como el tiempo, la temperatura) y el pretratamiento de la muestra tienen un impacto en el espectro infrarrojo, por lo que estas condiciones requieren la elaboración de protocolos de operación estandarizados.

En segundo lugar, la no Homología y la variabilidad durante el pretratamiento de la muestra (como el tamaño de la muestra, el grado de secado de la membrana bacteriana, etc.) y los factores de medición (como la dispersión de la luz causada por la apariencia de partículas de la muestra, etc.) pueden afectar el espectro infrarrojo. Por lo tanto, es necesario realizar múltiples mediciones de la misma muestra para garantizar la reproducibilidad del espectro infrarrojo.

En tercer lugar, la credibilidad de las muestras desconocidas identificadas por infrarrojos se basa en la fiabilidad de la base de datos espectral del espectro de referencia. Por lo tanto, las cepas de referencia deben identificarse con métodos confiables. De lo contrario, la información incorrecta en la biblioteca espectral dará lugar a una desviación del resultado final de la identificación. Combinando múltiples regiones espectrales significativas, se puede construir una base de datos de cepas bacterianas conocidas. Para clasificar e identificar bacterias desconocidas, la información espectral se compara con la base de datos de referencia de bacterias conocidas, mostrando microorganismos con patrones espectrales que coinciden con cepas desconocidas. La similitud de los diferentes espectros microbianos también se puede describir gráficamente en forma de árbol.