Kit de leucotrienos humanos B4 (ltb4)

Este kit se utiliza solo en estudios fuera del donante y no para diagnóstico clínico

Este kit se utiliza para la detección cuantitativa in vitro del contenido de leucotrienos humanos B4 (ltb4) en muestras de suero, plasma, homogeneizado de tejidos y líquidos relacionados.

Período de validez:6 meses

Condiciones de conservación:2-8℃

Composición del kit:

Nota:

1. (96t / 48t) después de abrir el embalaje, verifique si todos los artículos están completos a tiempo.

2. las concentraciones estándar son: 800, 400, 200, 100, 50, 25 pg / ML.

3. después de un gran número de pruebas de especímenes normales, los valores normales de concentración de los especímenes están dentro del rango de detección proporcionado por el kit, y las muestras de 50 μl se pueden tomar directamente durante el experimento. Cuando algunos valores de la muestra superan la concentración estándar, la muestra se puede diluir adecuadamente con una dilución de muestra antes de realizar el experimento.

Preparación previa a la prueba:

1. retire el kit del refrigerador con 20 minutos de antelación y equilibre a temperatura ambiente.

2. el detergente concentrado extraído del refrigerador puede tener cristalización y es un fenómeno normal; Coloque a temperatura ambiente, agite suavemente y uniformemente, y luego configure el detergente después de que la cristalización se disuelva. Se puede diluir 20ml de detergente concentrado con agua destilada o desionizada en 400 ml de detergente con concentración de trabajo, y el no usado se devuelve a 4 ℃.

Dilución de 3,20 × amortiguador de lavado: el agua destilada se diluye a 1: 20, es decir, 1 porción de 20 × amortiguador de lavado más 19 partes de agua destilada.

Kit de Elisa de leucotrienos humanos B4 (ltb4)

Principios experimentales:

El kit utilizó el método de sándwich de doble anticuerpo en un solo paso prueba de inmunoabsorción enzimática (elisa). En los microporos de la envoltura que preenvasan anticuerpos capturados por los leucotrienos humanos B4 (ltb4), se añaden sucesivamente especímenes, estándares y anticuerpos de detección marcados con hrp, que se crían y lavan a temperatura ambiente. Con el sustrato tmb para colorear, tmb se convierte en azul catalizado por peróxido y amarillo bajo la acción del ácido. La profundidad del color se relacionó positivamente con el Leucotrieno humano B4 (ltb4) en la muestra. La Absorbancia (valor de do) se determina a una longitud de onda de 450 nm con un medidor estándar enzimático y se calcula la concentración de la muestra.

Equipo de prueba propio necesario para el experimento:

1. medidor de estándar enzimático (450 nm)

2. muestreador de alta precisión y cabeza de pistola: 0,5 - 10ul, 2 - 20ul, 20 - 200ul, 200 - 1000ul

Incubadora de 3,37 ° C

4. agua destilada o desionizada

Manejo de muestras y requisitos:

1. suero: colocar las muestras de sangre entera recogidas en el tubo de separación de suero a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, y luego centrifugar 1000 × G durante 20 minutos, se puede extraer el suero, o colocarlo a - 20 ° c o - 80 ° C para conservarlo, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.

2. plasma: recoger el espécimen con EDTA o Heparina como anticoagulante y centrifugarlo a 2 - 8 ° C 1000 × G durante 15 minutos dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección, extraerlo para detectarlo o conservarlo a - 20 ° c o - 80 ° c, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.

3. homogeneización de tejidos: lavar los tejidos con PBS preconfriados (0,01m, pH = 7,4), eliminar la sangre residual (los glóbulos rojos agrietados en el homogeneizado pueden afectar los resultados de la medición) y cortar los tejidos después de pesarlos. El tejido cortado se compara con el volumen correspondiente de PBS (generalmente en una relación peso - volumen de 1: 9, como una muestra de tejido de 1G que corresponde a 9 ml de pbs, el volumen específico se puede ajustar adecuadamente de acuerdo con las necesidades experimentales y hacer un buen registro. Se recomienda agregar inhibidores de proteasa al pbs) en un homogeneizador de vidrio y moler completamente sobre Hielo. Para romper aún más los tejidos y las células, el homogeneizado se puede triturar por ultrasonido o congelar y descongelar repetidamente. El homogeneizado se centrifuga en 5000 × G durante 5 a 10 minutos y se extrae para su detección.

4. sobrenadante del cultivo celular: centrifugar 1000 × G durante 20 minutos, extraer el sobrenadante para detectarlo, o conservarlo a - 20 ° c o - 80 ° c, pero evitar la congelación y descongelación repetidas.

5. otros especímenes biológicos: 1000 × G centrifugación durante 20 minutos, se puede detectar tomando el líquido superior.

6. apariencia de la muestra: la muestra debe ser clara y transparente, y la suspensión debe eliminarse por centrifugación.

7. conservación de la muestra: si la muestra se detecta dentro de una semana después de la recolección, se puede conservar en 4 ° c. si no se puede detectar a tiempo, se embala de acuerdo con el uso de una vez, se congela en - 20 ° c (se detecta dentro de un mes) o - 80 ° c (se detecta dentro de 6 meses) para evitar la congelación y descongelación repetidas. la Hemólisis de la muestra afectará los resultados de la prueba, por lo que la Hemólisis de la muestra no es adecuada para esta prueba.

Precauciones:

1. educar estrictamente de acuerdo con el tiempo y la temperatura prescritos para garantizar resultados precisos. Todos los reactivos deben alcanzar una temperatura ambiente de 20 - 25 grados Celsius antes de su uso. Refrigerar y conservar el reactivo inmediatamente después de su uso.

2. el lavado incorrecto de la placa puede conducir a resultados inexactos. Asegúrese de secar el líquido en el agujero tanto como sea posible antes de agregar el sustrato. No deje que los microporos se sequen durante el proceso de calentamiento.

3. eliminar el líquido residual en el Fondo de la placa y las huellas dactilares, de lo contrario afectará el valor de od.

4. la solución de color del sustrato debe ser incolora o de color muy claro, y la solución del sustrato que se ha vuelto azul no se puede usar.

5. evitar la contaminación cruzada de reactivos y especímenes para evitar resultados erróneos.

6. evite la exposición directa a la luz fuerte durante el almacenamiento y el calentamiento.

7. después de equilibrar a temperatura ambiente, abra la bolsa de sellado para condensar las gotas de agua en la placa fría.

8. ningún reactivo de reacción puede entrar en contacto con el disolvente de blanqueamiento o el gas fuerte emitido por el disolvente de blanqueamiento. Cualquier ingrediente blanqueador destruye la actividad biológica de los reactivos de reacción en el kit.

9. no se pueden usar productos caducados.

10. si es posible transmitir la enfermedad, todas las muestras deben manejarse bien y las muestras y los dispositivos de detección deben procesarse de acuerdo con los procedimientos prescritos.

Pasos de operación:

1. retire las tiras necesarias de la bolsa de papel de aluminio después de equilibrar la temperatura ambiente durante 60 minutos, y las tiras restantes se sellen y devuelvan a 4 ° c con una bolsa selfie.

2. establecer agujeros estándar y agujeros de muestra, y agregar diferentes concentraciones de estándares de 50 μl cada uno.

3. a en el agujero de la muestra se añade 50 μl de la muestra a probar; No se agregan agujeros en blanco.

4. además de los agujeros en blanco, se añaden 100 μl de anticuerpos de detección marcados con superóxidasa de rábano picante (hrp) a cada agujero en el agujero estándar y el agujero de reacción sellado con una película de placa de sellado, y se cultiva en una olla de baño de agua a 37 ° c o en una incubadora durante 60 minutos.

5. descartar el líquido, secar el papel absorbente de agua, llenar el detergente (350 μl) con cada agujero, Dejar reposar durante 1 minuto, eliminar el detergente, secar el papel absorbente de agua, lavar la placa cinco veces así (también se puede lavar la placa con una lavadora).

6. añadir 50 μl de sustratos a y B a cada agujero e incubar a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

7. añadir 50 μl de líquido de terminación a cada agujero y determinar el valor de od de cada agujero a una longitud de onda de 450 nm en 15 minutos.

Los resultados experimentales se calculan:

Dibuja la curva estándar: en la hoja de trabajo de microsoft, toma la concentración de productos estándar como coordenada horizontal y el valor de od correspondiente como coordenada vertical, dibuja la curva de regresión lineal de productos estándar y calcula el valor de concentración de cada muestra de acuerdo con la ecuación de la curva.

(esta imagen es solo para referencia)

Kit de Elisa de leucotrienos humanos B4 (ltb4)

Rendimiento:

1. rango de detección: 25 pg / ML – 800 pg / ML.

2. sensibilidad: la concentración de detección es inferior a 1,0 pg / ML.

3. especificidad: no reacciona cruzadamente con otros análogos estructurales solubles.

4. repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es inferior al 10% y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%.

Consejos técnicos:

1. trate de evitar la espuma cuando mezcle o vuelva a disolver la solución de proteína.

2. para evitar infecciones cruzadas, es necesario cambiar la cabeza de la pistola para configurar diferentes estándares de concentración, aplicar muestras y agregar diferentes reactivos. Además, los diferentes reactivos deben utilizar diferentes tanques de transferencia de líquido.

3. al incubar cada vez, utilice correctamente el pegamento de sellado para garantizar la precisión de los resultados.

4. el sustrato de color después de la mezcla debe ser incoloro frente a la placa superior, por favor, guarde fuera de la luz; Si después de la placa microporosa, cambiará de color natural a azul de diferentes profundidades.

5. el orden de terminación de la placa líquida debe ser consistente con el orden de la placa superior del sustrato de color; Después de agregar el líquido de terminación, el color en el agujero cambia de azul a amarillo; Si hay verde en el agujero, indica que el líquido en el agujero no se ha mezclado bien; Por favor, mezcle completamente.

Descripción:

1. debido a que las condiciones existentes y el nivel científico y tecnológico aún no pueden llevar a cabo una identificación y análisis exhaustivos de todas las materias primas proporcionadas por todos los proveedores, este producto puede tener ciertos riesgos técnicos de calidad.

2. los resultados del experimento están estrechamente relacionados con la efectividad del reactivo, el funcionamiento relevante del experimentador y el entorno experimental en ese momento. asegúrese de preparar suficientes copias de Seguridad de especímenes.

3. puede haber algunas diferencias en el mismo producto en diferentes lotes, como: límite de detección, sensibilidad y tiempo de desarrollo de color, por favor, realice la operación experimental de acuerdo con las instrucciones en el kit, y las instrucciones electrónicas del sitio web solo se utilizan como referencia.

4. solo el uso total de los reactivos de apoyo de este kit puede garantizar el efecto de la prueba y no se puede mezclar con los productos de otros fabricantes. Los resultados de las pruebas solo se obtendrán siguiendo estrictamente las instrucciones experimentales de este kit.