I. Antecedentes

La flora intestinal es grande y compleja, la composición y los cambios fisiológicos de la microbiota intestinal humana están relacionados con múltiples enfermedades, y el estudio de la microbiota intestinal puede comprender mejor su relación con la salud humana. en la actualidad, para este estudio, el aislamiento y cultivo de la microbiota intestinal es crucial.

El modo tradicional de cultivo de aislamiento de la flora intestinal es principalmente el modo de placa. debido a la gran carga de trabajo, el modo de cultivo de placa tiene problemas de tiempo, esfuerzo e ineficiencia, y a menudo el efecto de cultivo no es bueno.Tecnología de control de microfluídicos de gotasCada vez hay más informes de aplicación en el cultivo de aislamiento de la flora intestinal, cuyo método es dispersar la flora intestinal en una sola gota independiente, proporcionando un espacio de límite líquido cerrado e independiente para el crecimiento de una sola cepa, promoviendo en gran medida el crecimiento microbiano, evitando que las cepas débiles estén cubiertas por cepas dominantes de crecimiento, aumentando Así los tipos y cantidades de microorganismos cultivables.

Este experimento crea automáticamente decenas de miles de unidades independientes de cultivo de gotas mediante el uso del instrumento Tianmu Biological Miss cell, dispersando microorganismos en cada gota para el cultivo independiente, y diferentes tipos de individuos bacterianos pueden crecer y proliferar plenamente en las gotas, eliminando al mismo tiempo el impacto del crecimiento excesivo y el rápido crecimiento de la población en el Cultivo comunitario.El método de cultivo basado en el equipo de células Miss supera en gran medida los defectos del método tradicional de cultivo plano y proporciona una importante plataforma de investigación para la identificación y descubrimiento de grupos raros de bacterias simbióticas intestinales y bacterias ambientales anaeróbicas.

2. proceso experimental de aislamiento y cultivo de la flora intestinal basado en equipos de tabletas y células Miss

1. pretratamiento de la muestra para determinar la concentración en la máquina

Después de recoger la muestra fecal para diluirla, se cuenta con una placa de recuento de sangre y se diluye la concentración de la muestra a 10000 - 30000 CFU / ML con un medio de cultivo. el flujo de trabajo es el siguiente:

2. aislamiento y cultivo de la flora intestinal en ambiente anaeróbico a través del equipo de células Miss

En este experimento se generaron alrededor de 20000 gotas, que fueron detectadas y clasificadas después de un cultivo anaeróbico de 37 ° C durante 30 días. después de 5 horas de clasificación, se obtuvieron alrededor de 4600 gotas bacterianas y se secuenciaron de alto rendimiento. el flujo de trabajo se muestra en la siguiente imagen:

3. la flora intestinal se separa y cultiva con tabletas

Un total de 15 tabletas fueron recubiertas en este experimento, recogidas después de un cultivo anaeróbico de 37 ° C durante 30 días y secuenciadas de alto rendimiento. el flujo de trabajo se muestra en la siguiente figura:

4. resultados experimentales

(1) se identificaron un 10,9% (13 / 119) más especies bacterianas (nivel de género) identificadas, significativamente mejores que el 0,8% (1 / 119) de las tabletas, en comparación con el Grupo de heces crudas no cultivadas, aisladas y cultivadas con equipos de células miss.

(2) el cultivo de gotas tiene un 40% más de riqueza de especies (nivel de género) que el cultivo de tabletas, y tiene un mejor efecto de enriquecimiento en bifidobacterium, triptoniphilus, collinsella, koala, enterococcus, porphyromonas, etc.

3. el instrumento Tianmu Biological Miss Cell proporciona soluciones automatizadas de alto rendimiento y eficientes para el proceso de aislamiento, cultivo y selección de bacterias anaeróbicas estrictas, como la flora intestinal.

En este estudio se utilizó el instrumento Tianmu Biological Miss Cell para generar un total de 20000 gotas, y se clasificaron alrededor de 4.600 gotas monoclonales para lograr el cultivo automatizado y la clasificación de la flora intestinal. al mismo tiempo, sobre la base de las ventajas del cultivo de gotas, se evitaron problemas de crecimiento competitivo y contaminación cruzada entre cepas y se mejoró significativamente la riqueza de bacterias enriquecidas después del cultivo.

¡Miss Cell realiza operaciones de alto rendimiento y automatización en todo el proceso de experimentación de la flora intestinal, mejora significativamente la capacidad de cultivo microbiano, reduce considerablemente la carga de trabajo de los experimentadores, mejora la eficiencia del trabajo, proporciona una plataforma experimental automatizada eficiente para el cultivo monoclonal y la detección de alto rendimiento, y proporciona un fuerte apoyo para el cultivo y la detección de cepas!