Antecedentes de la investigación:

El microfluídico de gotas, como tecnología de detección y selección de alto rendimiento desarrollada en los últimos años, es ampliamente utilizado en la evolución dirigida por enzimas, el desarrollo de anticuerpos, la detección de cepas de alto rendimiento y otros campos debido a sus ventajas de bajo costo y alto rendimiento. La clasificación de gotas activadas por fluorescencia es el método principal de selección de microfluídicos, y la detección de fluorescencia multicolor proporciona un apoyo importante para la selección más flexible de etiquetas fluorescentes y la construcción de sistemas de fluorescencia multiparametros más complejos.

Este experimento verificó la aplicabilidad funcional de la Plataforma drem Cell para la detección y selección de fluorescencia multicolor mediante la mezcla de microesferas fluorescentes verdes y rojas para el paquete de gotas, y luego la excitación y detección simultáneas de doble láser de las gotas para obtener datos sobre el Estado del paquete de microesferas en las gotas, sentando las bases para aplicaciones relacionadas.

Proceso experimental:

1. tratamiento de muestras: ajustar la concentración de microesferas fluorescentes verdes (lambda ex = 488 nm; Lambda EM = 520 nm; tamaño de partícula 5um) y microesferas fluorescentes rojas (lambda ex = 620 nm; Lambda EM = 680 nm; tamaño de partícula 5um) a 5x10 Mu 6 / ml; Mezclar los dos de acuerdo con la proporción de 1: 1;

2. envuelva las muestras anteriores en gotas en un clasificador de células microfluídicas de gotas (drem cell), recoja señales fluorescentes del canal de 520 nm (pmt3) y el canal de 670 nm (pmt1), respectivamente, y clasifique el grupo objetivo de gotas después de rodear la puerta; El proceso de uso del instrumento drem Cell se muestra de la siguiente manera:

Resultados experimentales:

1. se recogen las señales del canal de 520 nm (pmt3) y el canal de 670 nm (pmt1), respectivamente. en el mapa de señales en tiempo real de los dos canales, se pueden identificar y distinguir las gotas que contienen microesferas fluorescentes verdes, las que contienen microesferas fluorescentes rojas y las que están envueltas en microesferas fluorescentes rojas y verdes;

2. en el mapa de puntos de dispersión bidimensional, los grupos de gotas p1, P2 y P3 se clasifican por puerta circular, y las gotas recogidas se observan por microscopía. la siguiente imagen: los grupos P1 se clasifican por microesferas fluorescentes rojas, los grupos P2 se clasifican por microesferas fluorescentes verdes, y los grupos P3 se clasifican por microesferas fluorescentes rojas y microesferas fluorescentes verdes, que están envueltas en un total, en línea con las expectativas;

Conclusiones experimentales:

Este experimento utilizó el clasificador de células microfluídicas de gotas (drem cell) desarrollado por Tianmu Biology para identificar y distinguir las gotas mezcladas con microesferas fluorescentes rojas, las gotas fluorescentes verdes y las gotas envueltas en dos microesferas, y las puertas circulares se realizaron de acuerdo con las señales del canal de detección de doble fluorescencia, y se seleccionaron con éxito tres tipos de Grupos de gotas en las gotas mixtas, lo que demostró la precisión de la clasificación sistemática.

Perspectivas de aplicación:

La detección simultánea y el análisis de múltiples señales fluorescentes diferentes para muestras objetivo juegan un papel importante en el estudio de detección de alto rendimiento, como el estudio de evolución enzimática multifuncional, el estudio de interacción proteica, el estudio de detección de células inmunes, el estudio de PCR fluorescente múltiple, el cribado de anticuerpos, etc. los casos típicos del estudio de evolución enzimática se muestran en la siguiente imagen:

El estudio logró la modificación del complejo rasgo de la Estereoselectividad de la esterasa del ibuprofeno mediante el uso de dos sustratos marcados con fluorescencia diferente, y tras cinco rondas de mutaciones y cribado, los mutantes de alta calidad obtenidos aumentaron 700 veces la selectividad del sustrato del S - ibuprofeno (doi: 10.1038 / s41467 - 018 - 03492 - 6)