Los rellenos de purificación de proteínas son capaces de identificar y adsorber con precisión proteínas objetivo basadas en los diversos mecanismos de Acción anteriores, mientras que tienen una baja afinidad con la mayoría de las proteínas de impurezas. Esta alta selectividad permite separar eficazmente las proteínas objetivo en una compleja mezcla de proteínas, lo que mejora considerablemente la eficiencia y la pureza de la purificación y reduce la complejidad de los pasos de tratamiento posteriores.

Por un lado, es capaz de procesar una gran cantidad de muestras en un tiempo relativamente corto. Su rápido proceso de adsorción y desorción, así como un proceso razonable de diseño y operación de columnas, permiten que la purificación de proteínas se lleve a cabo en un Estado más eficiente, cumpliendo con los requisitos de tiempo y rendimiento en la investigación científica y la producción industrial. La integridad de su estructura y función se mantiene sin fallos debido a cambios leves en factores ambientales externos en una amplia gama de valores de ph, cambios en la intensidad de los iones y la presencia de disolventes orgánicos. Esto permite el uso confiable de rellenos de purificación de proteínas en diferentes condiciones de purificación, lo que garantiza la repetibilidad y consistencia de los resultados de purificación.

Precauciones para el uso de rellenos de purificación de proteínas:

1. selección y tratamiento de amortiguadores

- Composición del amortiguador: elija el sistema de amortiguador adecuado, cuyo ph, intensidad iónica y otros parámetros deben ser adecuados para la estabilidad de la proteína objetivo y la Unión al relleno. Al mismo tiempo, se pueden agregar cantidades adecuadas de aditivos según sea necesario, como inhibidores de proteasa, quelizadores metálicos, reductores, etc., para proteger la actividad proteica y prevenir la degradación proteica, la oxidación, etc.

- filtración y desgasificación de amortiguadores: todos los amortiguadores utilizados deben ser lixiviados por una membrana filtrante de 0,22 micras para eliminar impurezas y microorganismos. Y antes de su uso, es necesario restaurar el amortiguador conservado a baja temperatura a temperatura ambiente y desgasificarlo para evitar que el gas en el amortiguador afecte el efecto de separación durante el proceso de cromatografía.

2. control del proceso de operación

- control de temperatura: durante el proceso de purificación de la proteína, se debe tratar de operar en ambientes de baja temperatura, como en hielo o en almacenes frigoríficos, para evitar la desnaturalización y degradación de la proteína. Especialmente cuando se trata de proteínas sensibles a la temperatura, la temperatura debe controlarse estrictamente.

- control de la velocidad de flujo: controlar la velocidad de flujo de la columna de cromatografía para evitar que la velocidad de flujo demasiado rápida provoque una unión inadecuada de proteínas con rellenos o una elución incompleta, y evitar que la velocidad de flujo demasiado lenta afecte la eficiencia experimental. Los diferentes pasos de relleno y purificación pueden tener un rango de flujo adecuado y deben ajustarse de acuerdo con la situación real.

- evitar la contaminación: mantener la asepsia y la limpieza durante todo el proceso de operación, utilizar consumibles desechables como cabezas de succión, tubos y botellas, y limpiar y desinfectar estrictamente la cristalería reutilizable para evitar que bacterias, hongos u otras impurezas contaminen muestras y rellenos de proteínas y afecten el efecto de purificación.

3. protección y mantenimiento del relleno

- Prevención de grietas en seco: durante la operación, se debe evitar la exposición prolongada del relleno al aire que causa grietas en seco, afectando el rendimiento y la vida útil del relleno. Cuando no se utilice temporalmente, el relleno debe remojarse en un amortiguador adecuado.

- limpieza y regeneración: después de su uso, el relleno debe limpiarse a tiempo para eliminar las proteínas residuales y otras impurezas. Para algunos rellenos reutilizables, se debe regenerar de la manera correcta para restaurar su rendimiento y facilitar su próximo uso. Sin embargo, se debe tener cuidado de evitar el uso de condiciones de limpieza demasiado fuertes para no dañar el relleno.

- condiciones de almacenamiento: selección de las condiciones de almacenamiento adecuadas en función de la naturaleza del relleno. En términos generales, el almacenamiento a corto plazo puede remojar el relleno en 20 etanol y colocarlo en un refrigerador a 4 ° c; El almacenamiento a largo plazo requiere condiciones más estrictas, como - 20 ° c o Criopreservación a temperaturas más bajas.

4. precauciones de Seguridad

- protección personal: al manipular rellenos de purificación de proteínas, se debe llevar equipo de protección que cumpla con los estándares, como ropa protectora de laboratorio, guantes, máscaras y gafas, para evitar que los productos químicos nocivos entren en contacto directo con la piel, la boca, la nariz y los ojos.

- entorno experimental: la columna de purificación de proteínas debe colocarse en una mesa de trabajo estable y el entorno de operación debe estar bien ventilado, a una temperatura adecuada, libre de contaminantes como polvo y olor.