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El cromatógrafo de líquidos (clar) es uno de los instrumentos de prueba comúnmente utilizados en los laboratorios de análisis, y su aplicación es cada vez más amplia. En el proceso de uso de este instrumento, es inevitable que aparezcan varios problemas, lo que afectará directamente la precisión de los datos medidos y el funcionamiento normal del instrumento. Si el operador puede comprender las causas de las fallas, puede prevenir y resolver claramente estas fallas, puede usar correctamente el instrumento y Zui jugar el rendimiento del instrumento en un gran límite. Hoy vamos a compartir con usted varias cuestiones a las que debemos prestar atención en el uso del Cromatógrafo Líquido desde los siguientes aspectos.

Esquema de análisis de composición | esquema de análisis de superficie | sistema de preprocesamiento de muestras | esquema de análisis de superficie | prueba de dureza | prueba mecánica | muestra estándar

I. cuestiones relativas al uso de tubos de ensayo

1. problemas de limpieza de tubos de ensayo. El análisis por Cromatografía líquida es un método de análisis muy sensible que afecta la precisión de los resultados de la prueba si se utilizan tubos de ensayo sucios. Por ejemplo, cuando se utiliza metanol como disolvente para disolver la muestra, el pequeño tubo de ensayo utilizado se utiliza como tapa con un tapón de goma, por lo que en cada entrada de la muestra existe un pico de interferencia con un tiempo de retención fijo, que luego se confirma que es generado por un componente disuelto por remojar el tapón de Goma En metanol, y después de cambiar por un tubo de vidrio, el pico de interferencia se elimina.

2. el problema de la disolución de los tubos de ensayo de plástico. En los últimos años, los tubos de ensayo de plástico desechables han traído una gran comodidad a los probadores, pero es importante prestar atención a la disolución de los tubos de ensayo por disolventes orgánicos durante su uso. al usar este tubo de ensayo para extraer muestras, algunos disolventes orgánicos, como lvfang, tienen un fenómeno de disolución en la pared del tubo. estas sustancias disueltas a veces también pueden generar señales en el detector, interfiriendo así con la determinación de la muestra. En este momento, se puede probar primero en las mismas condiciones experimentales para ver si el extracto puede producir una señal de interferencia en el detector cuando no contiene el extracto. si hay una señal de interferencia, solo se puede cambiar por un tubo de vidrio resistente al disolvente orgánico.

3. el problema de la adsorción de la muestra medida en la pared del tubo de ensayo. Este problema también debe llamarse la atención, de lo contrario también afectará la precisión de los resultados de las pruebas, en el monitoreo de medicamentos terapéuticos (tdm), algunos medicamentos probados como amitriptilina, imipramina y otros son fáciles de absorber en la pared del tubo de vidrio, por lo que es apropiado utilizar tubos de polipropileno en la operación, para evitar la aparición de fenómenos de adsorción en la extracción, se puede utilizar el 0,5% de la solución de hexadiaminohexano como extractor, lo que puede prevenir eficazmente la adsorción.

2. problemas para operar la válvula de inyección de muestra

En la actualidad, la válvula de inyección comúnmente utilizada en el Cromatógrafo Líquido analítico es la válvula de inyección 7725, cuya estructura interna de válvula de seis vías hace que la operación de inyección sea muy conveniente, pero si no se utiliza adecuadamente, también traerá problemas. Por ejemplo, durante el ensayo de la cromatografía líquida, a veces hay problemas de picos anormales y mala reproducibilidad, principalmente debido a métodos de operación inadecuados, y para resolver tales problemas, hay que comenzar con los siguientes aspectos.

1. control de la cantidad de muestra. Al introducir la muestra con la válvula de inyección, el anillo de muestra en la válvula es cuantitativo (el volumen del anillo de muestra de la válvula de inyección de análisis general es de 20 ul), porque al inyectar la muestra, la solución de muestra inyectada en la válvula de inyección tiene un gradiente de velocidad radial en la tubería del anillo de muestra (es decir, la velocidad de flujo de líquido en el eje del tubo es más rápida que en la pared del tubo). Por lo tanto, para llenar el anillo de muestra con la solución de muestra y, por lo tanto, utilizar la válvula de inyección para cuantificar con precisión, la cantidad de inyección debe ser mayor que el doble del volumen del anillo de muestra. Si se utiliza una jeringa para controlar la cantidad de muestra, el tamaño de Zui solo puede inyectar la cantidad de 1 / 2 del volumen del anillo de muestra, lo que puede evitar que algunas muestras se desborden por un desbordamiento, lo que conduce a errores en el análisis cuantitativo.

2. problemas de limpieza de la válvula de entrada de muestra. Si hay residuos de la muestra en la última inyección en el anillo de la muestra, inevitablemente contaminará la muestra inyectada en la próxima inyección. para evitar este fenómeno, se deben seguir los siguientes pasos: A. la válvula de inyección tiene 2 posiciones, inject y carga. Primero, en la posición de carga, inyecte la fase móvil en la válvula de inyección varias veces con una jeringa para lavarla, con una dosis de unos 40 ul cada vez; B. cuando luego tire de la placa de la válvula de inyección a la posición del injec, limpie la fase móvil varias veces, con una dosis de 40 ul cada vez; después de c.zui, inyecte la muestra en la válvula de inyección.

Siguiendo los pasos anteriores, se puede evitar la contaminación causada por la válvula de inyección, eliminando así el pico de interferencia y mejorando la precisión de los resultados del análisis.

3. bloqueo de la tubería de desbordamiento de la válvula de entrada de muestra. A veces, el tubo de desbordamiento de la válvula de inyección se bloquea, y cuando se inyecta la muestra en la válvula de inyección, la aguja de inyección no se puede empujar. Esta falla se debe al bloqueo de la tubería de desbordamiento. La mayoría de las causas del bloqueo se deben a que la fase móvil de la muestra disuelta utiliza una solución salina, que se cristaliza en el puerto de vaciado del desbordamiento. En este momento, se puede remojar ligeramente la boca del tubo de desbordamiento con una pequeña cantidad de agua destilada en un pequeño vaso de precipitados, y la cristalización de sal en el puerto se puede disolver para resolver el problema. Si se puede lavar repetidamente toda la sal en el tubo de desbordamiento con agua destilada después de cada inyección de muestra, se puede evitar esta falla.

III. cuestiones relativas a la fase móvil (moblle phase)

El metanol y el nitrilo se utilizan a menudo en la preparación de fases móviles en el análisis de cromatografía líquida. Los reactivos comúnmente utilizados en la Cromatografía líquida son reactivos de alto nivel, como los reactivos puros de la cromatografía. Cuando los requisitos no son demasiado estrictos, se pueden usar reactivos puros de alto grado e incluso puros de análisis. Los detectores ultravioleta se utilizan comúnmente en el análisis de cromatografía líquida, por lo que, teniendo en cuenta la reducción del ruido Basal y el aumento de la sensibilidad del análisis, se deben utilizar reactivos puros de cromatografía con poca absorción ultravioleta y bajo contenido de impurezas.

1. filtración de la fase móvil. La fase móvil preparada debe filtrarse con una membrana filtrante microporosa de 0,5 um antes de su uso. Esto se debe a que la solución contiene muchas partículas diminutas que son difíciles de encontrar a simple vista y, si no se filtran, bloquean los filtros en la boca de la bomba y la cabeza de la columna, bloqueando así el canal normal de la fase móvil, aumentando la resistencia de la columna, aumentando la presión de la columna y disminuyendo la eficiencia de la columna. En este caso, se debe reemplazar la fase móvil filtrada y quitar el filtro bloqueado y remojarlo en una solución de agua de ácido nítrico al 20% para lavarlo con una lavadora ultrasónica durante 20 minutos para eliminar el bloqueo en el filtro.

2. desgasificación de la fase móvil. La fase móvil debe desgasificarse antes de su uso para eliminar el gas disuelto en la fase móvil en la medida de lo posible, de lo contrario, estos gases reducirán el rendimiento del relleno de la columna y también pueden causar una gran interferencia con la señal del detector. Hay muchos métodos de desgasificación, como desgasificación por ultrasonido, desgasificación por vacío, desgasificación por nitrógeno, etc. El método de desgasificación al vacío y el método de desgasificación por flujo de nitrógeno son los métodos de desgasificación comúnmente utilizados en Zui en la actualidad. La mezcla de agua y metanol produce una gran cantidad de burbujas que, si no se desgasifican, entran en la columna y en el detector y afectarán el desarrollo normal del trabajo de análisis.

IV. uso y mantenimiento de columnas cromatográficas

La columna cromatográfica es el componente principal del Cromatógrafo Líquido zui. si la sustancia medida se puede separar y determinar bien, el rendimiento de la columna cromatográfica juega un papel decisivo. Por lo tanto, en el trabajo diario, se debe prestar especial atención al uso correcto y mantenimiento de la columna cromatográfica para prolongar la vida útil de la columna.

1. use columnas previas y protectoras. La precolumna (pre - columna), instalada entre la bomba y el muestreador, proporciona un equilibrio de * para las fases móviles en la columna y evita la entrada en la columna de componentes o contaminantes que son destructivos para el relleno de la columna. La columna protectora (columna de guardia) puede bloquear la entrada de componentes que se pueden adsorber firmemente en la columna cromatográfica, y la columna protectora debe ser el mismo relleno que la columna cromatográfica. Las columnas precolumnas y protectoras se pueden reemplazar con frecuencia sin necesidad de reemplazar las columnas con frecuencia, lo que prolonga la vida útil de las columnas.

2. evitar que los gases entren en la columna cromatográfica. Algunas columnas cromatográficas, como las columnas de gel, no permiten la entrada de burbujas, de lo contrario reducirán la eficiencia de la columna e incluso formarán pequeñas cámaras de gas difíciles de eliminar. Por lo tanto, para evitar que las burbujas entren en la columna, es importante utilizar la fase móvil desgasificada e instalar la columna siguiendo estrictamente los siguientes pasos. A. retire el tornillo de sellado en la entrada de la columna de cromatografía inferior para observar si hay filtración de disolvente; B. si se filtra el disolvente, se puede conectar la columna cromatográfica a la tubería para evitar la entrada de burbujas; C. si se filtra sin disolvente, indica que este extremo de la columna ha entrado en el aire, en este momento, el extremo de salida de la columna se puede conectar a la válvula de entrada de la muestra para lavar la columna en la dirección opuesta con una fase móvil para eliminar el aire de la columna. Lavar la columna con un pequeño flujo de 0,2 ml / min, si el flujo del disolvente es demasiado rápido o la presión aumenta repentinamente, conducirá a una disminución del rendimiento de la columna; D. si el disolvente que sale no contiene burbujas, significa que el gas en la columna ha sido expulsado, y luego la columna se conecta en la dirección correcta para que las burbujas no puedan entrar en la columna.

3. limpieza de columnas cromatográficas. Para que la sustancia y las impurezas probadas no permanezcan en la columna, la columna debe limpiarse a tiempo después de cada trabajo de análisis de muestras. En primer lugar, se debe utilizar un disolvente con una fuerte capacidad de elución de la muestra medida para eluir la columna. tomemos como ejemplo el método de análisis de cromatografía de fase inversa comúnmente utilizado en el trabajo de análisis. debido a que la sustancia que sale primero es una sustancia polar grande, en este momento, se puede eluir la sustancia polar pequeña adsorbida en la columna con metanol al 100% o con un disolvente polar ligeramente débil como ipro puro y tetrahidrofurano. la cantidad de líquido de elución es generalmente 20 veces el volumen de la columna. Si la fase móvil es una solución tampón, la columna debe enjuagarse primero con agua destilada para eliminar la sal de la columna y luego con un disolvente adecuado.

Las columnas de gel utilizadas en la cromatografía de filtración de gel se utilizan a menudo como fases móviles con soluciones tampón, y por supuesto se enjuagan con agua destilada después de usarlas. Si se trata de una operación continua, se puede colocar la solución tampón en la columna durante la noche, pero se mantiene un pequeño caudal (menosde 0,5 ml / min) para evitar la precipitación de la sal tampón, y si la fase móvil contiene halógenos, incluso durante la noche, la columna debe enjuagarse con agua destilada para evitar su corrosión en la columna.

4. almacenamiento de columnas cromatográficas. Si la columna no se utiliza temporalmente, preste atención a los siguientes puntos al almacenarla:

A. para la colocación a corto plazo dentro de unos días, primero se debe lavar la columna colorista con un disolvente (por ejemplo, la columna de gel se debe lavar con agua destilada), y luego se deben sellar los dos extremos de la columna colorista con tornillos de sellado.

B. si la columna no se utiliza durante mucho tiempo, no se puede tratar solo con el método anterior. en este momento, la columna debe llenarse con el disolvente especificado en las instrucciones de uso de la columna. la columna de fase inversa generalmente utiliza metanol, mientras que la columna de fase positiva puede usar n - hexadecano o heptano, mientras que la columna de gel no puede usar agua, ya que si hay crecimiento microbiano en la columna, la eficiencia de la columna se reducirá. en este momento, la columna se enjuagará con una solución de agua Nans (conservante) del 0,05%, y luego se sellará la columna. Cuando la columna se coloca durante mucho tiempo, es necesario sellar los dos extremos de la columna para evitar la contracción seca del relleno de la columna debido a la volatilización del disolvente, lo que puede conducir a una grave reducción de la eficiencia de la columna.

C. la columna debe almacenarse a temperatura ambiente y, si se coloca por debajo de 0 ° c, se congelará en la columna, lo que también provocará una disminución de la eficiencia de la columna.

V. el problema de los picos dobles de los picos cromatográficos

Después de un uso prolongado, la columna, si hay impurezas que entran, hace que la fase fija en la entrada de la columna se "aglomere" y, bajo la acción de alta presión generada por la fase móvil, se forme un colapso de la cabeza de la columna, y el pico normal de la composición de la muestra analizada se convierte en un doble pico, Cuando la columna se puede reparar de la siguiente manera. En primer lugar, desenrosque la tuerca de fijación de la cabeza del pilar, y en este momento se encontrará que la fase de fijación en la cabeza del pilar ha sido comprimida, que se puede retirar más de 10 mm en casos graves. En este caso, podemos quitar la parte amarillenta de la Unión de la capa superficial de fase móvil con la punta de la aguja, llenar y compactar esta zona de colapso con la misma fase de fijación, y luego apretar los tornillos de fijación de la columna cromatográfica, y el trabajo de reparación termina. Cuando se vuelve a tomar la muestra con una columna cromatográfica restaurada, el pico cromatográfico vuelve a la normalidad.

Lo anterior introduce el uso correcto del cromatógrafo y el método de resolución de problemas desde varios aspectos. En el trabajo diario, si se pueden tomar estos asuntos en serio y resolver los problemas a tiempo, se prolongará considerablemente el período normal de uso del instrumento y se maximizará el rendimiento del instrumento por zui.