La placa de cromatografía de capa fina de placa H de silicona (tlc) es una herramienta de análisis común, ampliamente utilizada en química, farmacia y otros campos, para separar y analizar los componentes de diferentes sustancias. La cromatografía de capa fina (tlc) es una técnica de separación basada en las diferencias en la distribución de sustancias entre fases fijas y móviles. Los siguientes son los pasos básicos del método experimental de la placa de cromatografía de capa fina de placa H de silicona:
Materiales y equipos
Placa de cromatografía de capa fina de silicona H (silicogelhtlcplate)
Sistema de disolventes (fase móvil, generalmente mezcla de disolventes)
Solución de muestra
Reactivos de pulverización (como amoníaco, detectores ultravioleta, etc.)
Ranura de desarrollo (como ranura de vidrio)
Capilares (para muestras puntuales)
Lámparas ultravioleta u otros agentes de desarrollo de color (como vapor de yodo, para el desarrollo de color)
Pipeta, cilindro medidor, etc.
Pasos experimentales
1. preparar el tablero TLC
Para cortar la placa H de silicona, generalmente se elegirá el tamaño adecuado, generalmente una placa pequeña de 2,5 cm x 7,5 cm.
Marque suavemente la línea de inicio con un lápiz (generalmente a 1 - 2 cm de la parte inferior de la placa), que es el lugar donde se toma la muestra.
2. preparar la solución de muestra
Disolver la muestra a analizar en un disolvente adecuado, la concentración es generalmente entre 1 - 5 mg / ML. Al usar el disolvente, preste atención a su compatibilidad con la fase móvil.
3. haga clic en la muestra
Use un capilar para colocar cuidadosamente la solución de muestra en la línea de partida de la placa tlc. Al tomar muestras, cada vez que se toma una muestra, se debe esperar a que el disolvente se volatilice completamente para evitar el exceso de muestras.
Se pueden pedir varias muestras, pero se debe mantener una distancia adecuada entre ellas para evitar una separación incompleta.
4. preparación de tanques y disolventes para el desarrollo
Añadir una cantidad adecuada de fase móvil (disolvente) a la ranura de desarrollo de vidrio. La selección de la fase móvil debe basarse en la polar de la sustancia objetivo, con sistemas de disolventes comunes como n - hexano, acetato de dietilo, cloroformo, metanol y otras mezclas.
El nivel de líquido del disolvente debe estar por debajo de la línea de partida de la placa TLC para evitar que la muestra se disuelva por el disolvente.
5. desarrollo (separación)
Coloque la placa TLC recubierta con la muestra verticalmente en la ranura de desarrollo para asegurarse de que el Fondo de la placa esté sumergido en el disolvente pero no entre en contacto con el punto de muestra.
Deje que el disolvente suba a lo largo de la placa TLC y separe con la muestra. Cuando el frente del disolvente se eleva hasta la parte superior de la aproximadamente placa, se detiene el desarrollo.
Si es necesario, se puede utilizar un dispositivo de condensación para mantener el vapor de disolvente en la ranura, lo que hace que el proceso de desarrollo sea más uniforme.
6. extracción y secado
Retire la placa TLC de la ranura de desarrollo y marque la posición del Frente del disolvente con un lápiz.
Coloque la placa TLC en el aire o seque con un horno para asegurarse de que el disolvente se volatilice completamente.
7. pruebas
Si la muestra tiene propiedades de absorción ultravioleta, se puede irradiar directamente la placa TLC con una lámpara ultravioleta para observar la posición de las manchas separadas.
Si la muestra no tiene absorción ultravioleta, se puede utilizar un spray de reactivo de color (como amoníaco, vapor de yodo, reactivo que contiene azufre, etc.) para la reacción de color.
Observando bajo una luz de color o ultravioleta, se pueden ver diferentes manchas, y la velocidad de movimiento de las manchas (valor rf) se puede utilizar para identificar la sustancia.
8. resultados del análisis
Se miden los valores de RF de cada punto de separación (distancia de migración del punto / distancia de migración del Frente del disolvente) y se analizan comparando los valores de RF de los materiales de referencia conocidos.
Precauciones
Selección del disolvente: selección del sistema de disolvente adecuado para garantizar un buen efecto de separación en función de las diferentes sustancias.
Cantidad y precisión de la muestra: la cantidad de muestra no debe ser excesiva para evitar que la disolución incompleta de la muestra o las manchas excesivas dificulten la resolución.
Estanqueidad de la ranura de desarrollo: asegúrese de que la ranura de desarrollo esté bien sellada y evite que el disolvente se evapore demasiado rápido.
Entorno experimental: durante el experimento, se deben evitar demasiadas vibraciones y corrientes de aire para no afectar el efecto de separación.
A través de estos pasos, se puede realizar un experimento de TLC con una placa H de silicona para separar y analizar con éxito muestras complejas.