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¿¿ exosoma estudia la cáscara de la tarjeta? Simple Western duplica la eficiencia de la detección
Fecha:2025-10-21Leer:1
ExosomasSon pequeñas nanopartículas lipídicas derivadas del cuerpo interno, de unos 30 - 200 nanómetros de diámetro, y la mayoría de las células vivas secretan activamente exosomas a través de la exocitosis.[1]. tanto en el estado patológico como fisiológico, la Liberación del exocrino puede ser tanto persistente como inducida, y el proceso de liberación es dinámico, controlable y funcional. La composición molecular y la Liberación del exosoma dependen del Estado de su célula de origen. Los exosomas se pueden aislar y obtener de una variedad de líneas celulares y cultivos primarios, así como de suero, plasma, saliva y otros líquidos biológicos. Dada la diversidad de fuentes, el cuerpo secretor tiene funciones fisiológicas multifuncionales y cada vez más estudios han demostrado que desempeña un papel importante en una variedad de Estados patológicos, como el cáncer, las enfermedades infecciosas y las enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, el exocrino se convierte en un objeto clave de investigación en el método de biopsia líquida.[2]Además, el exosoma puede transformarse en unVectores potenciales de entrega de medicamentos[3].
Debido al pequeño tamaño de los exosomas, la separación de los exosomas de sustratos biológicos complejos es difícil y el rendimiento de separación suele ser bajo.En este contexto, Simple Western ™ Se convierte en la técnica ideal para estudiar el exocrino: este método requiere solo 3 litros de muestra y tiene una sensibilidad de nivel piqué, lo que reduce drásticamente los requisitos del Blot occidental tradicional para la cantidad de exocrino requerida.Posteriormente, se pueden caracterizar y analizar utilizando anticuerpos de detección específicos de antígenos relacionados con el exocrino, que pueden ser tanto marcadores universales del exocrino como todos los marcadores de sus células o fluidos corporales de origen. En este Protocolo experimental, utilizaremos los estándares y anticuerpos exocrinos disponibles en el mercado para ™ Marcadores universales y marcadores específicos de origen para la detección de exosomas.
Este artículo presenta los resultados de la verificación de la efectividad de los anticuerpos en la siguiente tabla con tres estándares de exocrina, "plasma humano, suero humano y células humanas a549 (células de adenocarcinoma epitelial Basal alveolar)":
01. expresión de marcadores exocrinos universales
- flotilin - 1: como marcador universal clásico, detectado en los tres estándares (figura 1a).
• alix: se expresa en los tres estándares, pero la expresión es mayor en el exocrino de origen celular a549 (figura 1d).
02. expresión de marcadores específicos de origen
- annexin v: como marcador de la apoptosis y proteína anticoagulante en la sangre, se detectó en células a549, en el exosoma de origen plasmático y no en el exosoma de origen serológico (figura 1b).
• egfr (her1): solo se detectó en los exosomas de origen celular a549, sin señal en los exosomas de origen sérico y plasmático (figura 1c).
Figura 1 uso de simple West ™ Se mide el antígeno objetivo del exocrino. A：flotillin-1； B：Annexin V； C：EGFR； D：Alix。
03. marcadores de las necesidades especiales de tratamiento
• cd63: solo se puede detectar una señal que indica el efecto de la modificación glicosilada en la detección de este marcador después de procesar el estándar de exocrina con Pngase f (desglicosilasa) (figura 2).
04. verificación de otros marcadores
El resto de los anticuerpos de la tabla 2 (como annexin a2, hspa8 / hsc70, tsg101, etc.) fueron verificados por simple Western y la señal objetivo se puede detectar en el estándar de secreción correspondiente (figura 2).
Figura 2. vista de la pista de detección de cada antígeno objetivo en los estándares de exocrina de origen plasmático y celular a549.
- - el valor central de la tecnología simple West - -
(1) traza alta eficiencia:Solo se necesitan 3 - 5 μl de lisado de exocrina (bm tradicional necesita 50 μl +), adecuado para muestras preciosas; Todo el proceso capilar reduce la pérdida de muestras y es adecuado para proteínas de membrana de baja abundancia.
(2) alta sensibilidad: límite inferior de detección de nivel piqué, se puede medir cd63 / alix, etc., y se puede descifrar la interferencia glicosilada a través del procesamiento Pngase F para lograr pruebas específicas como egfr.
(3) interferencia anti - matriz: 12 - 230 KDA CE para eliminar impurezas, el exocrino se puede poner directamente en la máquina después de la lisis, sin necesidad de purificación engorrosa.
(4) cuantificación múltiple: una sola muestra mide simultáneamente ocho objetivos, que cumplen con el estándar misev, y el rango dinámico cubre seis órdenes de magnitud.
(5) proceso automatizado: 3 horas de automatización completa para producir resultados y reducir la degradación de proteínas; El control de calidad independiente de cada agujero satisface la preparación del sistema de secreción de control de calidad.
(6) cuantificación precisa: apoyo a la cuantificación absoluta / relativa, bajo tamaño de muestra + alta repetibilidad, adaptación al desarrollo de marcadores de biopsia líquida y aceleración de la investigación científica a la transformación clínica.
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* referencias:
1. Exosomas, D M Pegtel y S J Gould, Revisión Anual de Bioquímica, 2019, 88:487–514.
2. Vesículas extracelulares – biomarcadores y efectores del interactomo celular en el cáncer, J Rak, Fronteras en Farmacología, 2013, 4:21.
3. Exosomas como sistemas terapéuticos reconfigurables, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari y I Mendes Pinto, Tendencias en Medicina Molecular, 2017, 23(7):636–650.
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