Preparación del equipo: verifique si la conexión de la fuente de alimentación y la fuente de gas de la sacudidora de CO2 (cilindro de co2) es normal para garantizar que la presión de la válvula de reducción de presión de CO2 sea estable (generalmente 0,1 a 0,2 mpa). Encienda la fuente de alimentación del dispositivo, precaliente a la temperatura establecida (por ejemplo, 37 ° c) y precaliente la bandeja de agua en la incubadora para mantener la humedad.

Configuración de parámetros: establecer la concentración de CO2 (generalmente 5%) de acuerdo con las necesidades de la célula, calibrada a través de sensores infrarrojos o termoconductores; El rango de temperatura establecido es generalmente de temperatura ambiente a 50 ° c, y es necesario precalentar con antelación para evitar fluctuaciones de temperatura; Ajustar la velocidad de rotación (50 a 300rpm) y la amplitud (generalmente 5 a 50mm) de acuerdo con el recipiente de cultivo para evitar salpicaduras de líquido; Añadir agua destilada estéril a la bandeja de agua para mantener una humedad ≥ 95%.

Colocación de la muestra: el recipiente debe sellarse (por ejemplo, utilizando una película de tapa transpirable o apretando la tapa) para evitar la fuga y contaminación de co2; Coloque las muestras de manera equilibrada para evitar que el desplazamiento del Centro de gravedad afecte el funcionamiento de la mecedora.

Monitoreo de la operación: verifique regularmente si la concentración de CO2 y la temperatura son estables y registre los parámetros de operación; Al usar una tapa transpirable para cultivar una botella o una botella sellada, es necesario equilibrar la penetración de co2.

Cierre de la operación: cierre la fuente de gas co, apague después de que la concentración caiga al 0%, para evitar daños en el sensor; Limpiar la bandeja de agua y la cavidad para evitar la cría de microorganismos.

II. guía de las mejores prácticas para el Cultivo celular

Selección del tipo de célula y del medio de cultivo: seleccionar el medio de cultivo adecuado de acuerdo con el tipo de célula, como la línea celular adecuada para la rápida proliferación de dmem, y el MEM es adecuado para varios tipos de células; Las células primarias necesitan agregar factores de crecimiento especiales.

Reanimación celular y criopreservación: descongelar rápidamente las células durante la reanimación y reducir el daño de los cristales de hielo; Añadir protector de congelación (como 10% dmso) al congelar y enfriar lentamente a - 80 ° C y transferirlo al nitrógeno líquido.

Operación estéril: todas las operaciones se llevan a cabo en una mesa de trabajo súper limpia, con ropa experimental, guantes, máscaras y sombreros; Evite hablar y toser en el área de operación y reduzca el riesgo de transmisión microbiana por el aire.

Observación y registro periódicos: observar regularmente el crecimiento celular bajo un microscopio, incluida la morfología celular, la densidad de crecimiento y la contaminación; Registrar los datos relevantes para detectar y manejar las anomalías a tiempo.

Mantenimiento y calibración del equipo: calibrar regularmente el sensor coš (cada seis meses) y reemplazar la película filtrante (si la hay); Apague la electricidad durante la limpieza para evitar que el líquido entre en el sistema de circuitos.