Total de plantasARNLa extracción es el paso básico central de la investigación en biología molecular, y su calidad determina directamente la secuenciación del Transcriptoma y la cuantificación de la fluorescencia en tiempo real.PCRY el éxito o el fracaso de los experimentos aguas abajo. Plantas, sin embargoParedes celulares duras, endógenas activasRNaseY abundantes metabolitos secundarios de polifenoles de polisacáridos, a menudo conducen a métodos de extracción tradicionales ineficientes. En particular, el molienda manual tradicional de nitrógeno líquido tiene un bajo flujo de tratamiento, una mala repetibilidad de la operación y es fácil de causar debido al calentamiento de la molienda.ARNProblemas como la degradación se han convertido en cuellos de botella que restringen la investigación.

Este esquema optimiza los parámetros de operación y el proceso del molino de organización de alto rendimiento de escritorio a través del sistema, y construye un conjunto deRotura de alta eficiencia, protección a baja temperatura durante todo el proceso, salida estandarizadaEl sistema integrado de preprocesamiento de muestras tiene como objetivo resolver sistemáticamente los problemas técnicos anteriores.

I. análisis de las dificultades técnicas y el mecanismo de respuesta del molino

Para mostrar claramente los principios técnicos de este programa, pondremos las plantasARNLos principales desafíos de la extracción se comparan con el mecanismo de diseño específico del molino de la siguiente manera:

II. procesos operativos estandarizados (tomando como ejemplo las hojas de las plantas)

1. Preparación experimental

• Equipos y consumibles: Molino de tejido de alto rendimiento de escritorio (recomendado7PulgadaTFTPantalla táctil, adaptadores preconfriados de nitrógeno líquido, perlas molidas de Zirconia (diámetrode 3 a 5 mm), ningunoRNasa 2 mlTubo centrífuga,ARNKit de extracción.

• protección de seguridad: se deben usar guantes anticongelantes, gafas antishock y ropa protectora durante toda la Operación para garantizar que la cubierta esté cerrada y que la función de frenado de emergencia sea normal.

2. Pasos operativos básicos

1. Preprocesamiento de muestras: Yu WuRNaseMesa de trabajo, recoger50 a 100 mgHojas frescas, cortadasde 1 a 2 mmFragmentos, lanzados rápidamente con1 ml de aguaSolución de craqueo y1En el tubo centrífuga de las cuentas molidas, cubra y marque.

2. Preconfriamiento del conector: sumerja el conector colocado simétricamente en el tubo de muestra en su conjunto en nitrógeno líquido1 - 2Minutos hasta que el nitrógeno líquido deje de hervir y asegúrese de que la muestra se congele.

3. Configuración de los parámetros del instrumento: iniciar el modo de baja temperatura del molino y esperar la temperatura de la cavidad≤ - 30℃Después, establezca los parámetros: frecuencia30-35 Hz, tiempo45 - 60Segundos, activar aceleración/.Procedimiento de desaceleración..2Cambio en segundos).

4. Iniciar el procedimiento de molienda: retire rápidamente el conector del nitrógeno líquido..Este paso al inicio debe controlarse en30En segundos) instale y cierre inmediatamente la tapa y inicie el programa. Una vez completado, el tubo de muestra se transfiere rápidamente a la Caja de Hielo.

5. ARNRecuperación inicial:4℃, 5000 rpmCentrifugadora30Segundos para mezclar el lisado con el homogeneizado y luego entrar directamente en el kit.ARNPasos de purificación.

3. Precauciones clave

• Control de tiempo: estricto cumplimiento“Oro30segundo",Principio para evitar que las muestras se descongelen antes del arranque.

• Principio de equilibrio: colocación simétrica del tubo de muestra, la diferencia de peso del agujero único no superade 10 mg.

• Adaptación de parámetros: las diferentes organizaciones deben optimizar los parámetros, con referencia específica a la siguiente tabla:

plantaARNTabla de optimización de parámetros de extracción y molienda

III. ventajas del programa y evaluación de la calidad

1. ventaja central

• Calidad estable: baja temperatura y garantía de rotura eficiente durante todo el procesoARNIntegridad,AdemásEl valor se estabiliza en8.5Lo anterior (método tradicional aproximadamente6.0); Visualización por gel de agarosaARNr28S/18SLas tiras son claras y no hay cola de degradación.

• Alto rendimiento y buena pureza: por miligramo de tejidoARNTasa de gananciade 4 a 6 μg,NanodropDetecciónOD260/280para2,0 – 2,1,OD260/230 ≥ 1,8Reducción de residuos de Polisacáridos60%Arriba.

• Excelente eficiencia: lote único192Solo se necesita molienda de muestras15Minutos, ahorro80%Tiempo; Coeficiente de variación dentro del lote(CV)Por debajo5%, mayor repetibilidad.

• Amplia aplicación: Al ajustar los parámetros, se puede adaptar a plantas especiales con alto contenido de hierbas, madera, algas y polifenoles (como árboles de té y Salvia miltiorrhiza).

2. Proceso estandarizado de evaluación de la calidad

1. Integridad: usoAgilent 2100Analizador biológico,≥ 8,0(criterios de secuenciación del transcriptoma) o≥ 7,0(ordinarioPCR) está calificado.

2. Pureza: detección por espectrómetro ultravioleta,OD260/280Relación1,9 – 2,2Y sin picos diversos,OD260/230 ≥ 1,7.

3. Tasa de ganancia: el método cuantitativo de fluorescencia determina con precisión la concentración y calcula la eficiencia de extracción en combinación con el peso de la muestra inicial.

IV. Resumen y perspectivas

El Molino de tejido de alto rendimiento de escritorio pasa “Rotura de alta frecuencia-Protección a baja temperatura-Diseño antiincrustante", La triple sinergia tecnológica ha conquistado sistemáticamente las plantas.ARNLos cuatro problemas centrales de la extracción. Su proceso de estandarización no solo garantizaARNAlta calidad y alta estabilidad de las muestras, con un mejor flujo como estudio de biología molecular vegetal a gran escala (por ejemploGWAS,ncARNLa investigación) proporciona un fuerte apoyo.

De cara al futuro, con el desarrollo del control inteligente y la tecnología de Internet de las cosas, este tipo de dispositivos se integrarán.IASistema adaptativo de parámetrosLograr la coincidencia inteligente de los esquemas de molienda y la trazabilidad en tiempo real de los datos experimentales, y promover la investigación botánica hacia un mayor nivel de estandarización, automatización e inteligencia.