I. preparación previa a la regeneración

　　Columna de Cromatografía líquida ultraPreparación con reactivos: preparación de agua ultrapura, metanol, nitrilo, alcohol isopropósico y otros disolventes cromatográficos, así como botellas de recogida de residuos líquidos adaptadas; Asegúrese de que no haya fugas en el cuerpo de la bomba y la válvula de entrada del cromatógrafo líquido.

Inspección de la columna: antes de la regeneración, se registran los datos actuales de la eficiencia de la columna y la forma del pico de la columna. si hay residuos contaminantes fuertemente conservados en la columna, primero se debe evaluar si la columna tiene valor de regeneración.

Operación segura: use guantes y gafas protectoras durante la Operación para evitar que los disolventes orgánicos entren en contacto con la piel; Asegúrese de que el laboratorio esté bien ventilado.

2. pasos generales de regeneración (principalmente columnas de fase inversa)

Enjuagar los residuos de fase móvil

Retire la columna cromatográfica, Enjuague con agua ultrapura a un bajo caudal (0,2 - 0,3 ml / min) durante 30 - 60 minutos, elimine las impurezas solubles en agua, como la sal tampón, y evite que la precipitación de sales bloquee el relleno.

Si la fase móvil contiene un reactivo de par de iones, es necesario enjuagar con una solución acuosa de metanol al 50% durante 1 - 2 horas antes de cambiar al metanol puro.

Eliminación de contaminantes altamente hidrofóbicos

Lavar la columna con metanol al 100% y nitrilo al 100%, manteniendo un caudal de 0,3 a 0,5 ml / min, y el volumen de lavado de cada disolvente es de 20 a 30 veces el volumen de la columna.

Si los contaminantes son obstinados, se puede optar por enjuagar con propanol (preste atención a la alta viscosidad del propanol, reduzca la velocidad de flujo para evitar que la presión de la columna sea demasiado alta), y después del enjuague, transite con metanol.

Limpieza de contaminantes polares

Para las columnas que contienen impurezas polares, enjuagar con una mezcla de metanol - agua (1: 1) durante 60 minutos y luego enjuagar con metanol puro hasta que la línea de base sea estable.

Equilibrio tras la regeneración

Columna de equilibrio de fase móvil con método de análisis objetivo, con un volumen de equilibrio no inferior a 10 veces el volumen de la columna, hasta que la línea de base se estabilice antes de realizar el análisis de la muestra.

3. precauciones para la regeneración de columnas cromatográficas de tipos especiales

Columna de cromatografía de fase positiva: se prohíbe el lavado con disolvente acuoso, se enjuaga con n - hexano, Diclorometano y acetato de dietilo a su vez durante la regeneración, y finalmente se conserva en equilibrio con n - hexano.

Columna de intercambio de iones: enjuagar primero con una solución tampón del pH correspondiente, luego enjuagar con agua desionizada a neutral y finalmente conservarla con una solución tampón que contiene 5% de metanol.

Columna cromatográfica quiral: priorizar el uso de disolventes reciclados recomendados por el fabricante, evitar el uso de disolventes polares fuertes y evitar la destrucción de fases fijas quirales.

IV. verificación y conservación después de la regeneración

Verificación del rendimiento:Columna de Cromatografía líquida ultraDespués de la regeneración, se inyecta el estándar para probar la eficiencia de la columna y la simetría del pico. si la forma del pico mejora y la eficiencia de la columna vuelve a más del 80% del nivel original, indica que la regeneración es exitosa.

Conservación a largo plazo: la columna de fase inversa se sella y conserva con metanol puro, la columna de fase positiva se conserva con n - hexano, los tapones se aprietan en ambos extremos y se colocan a temperatura ambiente y en un ambiente protegido de la luz.