I,Introducción

Las mascotas suelen ser consideradas miembros peludos (escamas, plumas, etc.) de nuestra familia directa y juegan un papel importante en la vida moderna. No es de extrañar que los artículos para mascotas estén sujetos a un escrutinio más estricto de su dieta, desde camas calientes hasta servicios profesionales de belleza. Las formas de comida para perros son diversas y las diferentes recetas también son beneficiosas para la salud y arriesgadas. Recientemente, una dieta libre de cereales o rica en legumbres se debe a su relación con enfermedades cardíacas caninasMiocardiopatía dilatada..DMSe cuestiona la conexión entre ellos, una enfermedad que puede causar insuficiencia cardíaca congestiva y, en última instancia, puede causar la muerte.DMSe debe a la falta de taurina, por lo que la dieta de los perros debe contener una cantidad suficiente de taurina.

En este estudio, con discover prep ™ Las muestras de alimentos para perros se hidrolizan sistemáticamente para liberar aminoácidos de las proteínas a las que se unen. En comparación con la tecnología tradicional de degradación, discover prep utiliza microondas para la degradación de muestras, reduciendo el marco de tiempo de la tecnología de 24 horas a menos de una hora. Después de la hidrolización, la muestra fue neutralizada y se utilizó Waters accq - tag ® El kit mide el contenido de aminoácidos. Los resultados muestran que discover prep puede hidrolizar la taurina de proteínas de los alimentos para mascotas de manera rápida y precisa en comparación con los métodos tradicionales, con una buena precisión. Se comparó el contenido de taurina en muestras de alimentos para perros sin cereales y alimentos para perros con cereales. Discover prep es una opción ideal para cuantificar en laboratorio la taurina y otros aminoácidos en la comida para perros.

En segundo lugar,Materiales y métodos

Reactivos y muestras

Todos los reactivos se compran a proveedores comerciales. Todas las muestras de comida para perros se compran en tiendas locales de productos para mascotas. Todas las muestras de comida para perros se molieron con una mezcladora de cocina comercial. Estos alimentos para perros se seleccionan porque tienen diferentes componentes proteicos principales y contienen nominalmente altos niveles de taurina. Se analizaron tres muestras: muestras1Es una receta de salmón, batata y calabaza, muestra2Es una receta de pollo y batata, muestra3Es una fórmula de pavo y avena. La solución hidrolizada se prepara fresco antes de su uso.

Uso de muestras de comida para perrosCEM Descubre PreparaciónEl sistema se hidroliza. El contenido de aminoácidos del hidrolizado se determina mediante derivación precolumna y luego se pasaUPLC^®Inyección y en260 nmAbajoPDADetección para análisis. usarAguas AccQ-Tag UltraEl kit de derivación realiza el hidrolizadoLC-PDAAnálisis.Descubre PrepLos resultados de la preparación de la muestra se compararon con el método tradicional del horno y la etiqueta nutricional.

Descubre PrepPreparación de muestras

Poner100Se añaden muestras de miligramos de comida para perros con palos de mezcla35 mL Descubre Pyrex^®En la botella pequeña. Registrar la calidad para el análisis. Para la hidrolización ácida, añadir a cada vial5Ml contiene1%Fenol6 N HCl. para todos los vialesN₂Barrido1Min y luego tapa rápidamente. Las muestras se presionan por debajoDescubre PrepFuncionamiento del método:

Hidrolisis ácida

Tipo de vial:Pyrex

Tipo de control: dinámico

Temperatura:160 °C

Tiempo:30minuto

Presión:300 PSI

Potencia:300 W

Agitación: alta

Preparación tradicional de muestras hidrolizadas

Poner40Añadir una muestra de miligramos de comida para perros al vial de vidrio adecuado. Registrar la calidad para el análisis. Para la hidrolización ácida, añadir a cada vial2Ml contiene1%Fenol6 N HCl. para todos los vialesN₂Barrido1Min y luego tapa rápidamente. A continuación, coloque el vial en la configuración110 °CEn el horno de aire24Horas.

Preparación de muestras y análisis de derivación después de la hidrolización

Para muestras hidrolizadas ácidas6 N NaOHNeutralización y uso simultáneoPTFE de 0,26 umFiltro de jeringa filtrado. Después de la neutralización, se utiliza la muestra.Aguas AccQ-TagEl kit se deriva. Añadir a un vial de reciclaje completo80 µLDeAguas AccQ-Tag UltraAmortiguador de ácido bórico del kit derivado. Luego, unirse10 µLMuestra y tapa el vórtice de la tapa. A continuación, se añade a cada reacción de muestra10 µLReactivos derivados Listos. Finalmente, el vórtice de reacción10Segundos y luego en55 °CCalefacción inferior10Minutos para el análisis.

Análisis

Cada reacción derivada se toma1 μLInyección de muestraAguas AccQ-Tag Ultra C18Columnas..1,7 μm, 2,1 x 100 mm), la columna está conectada aAguas PDADetectorWaters ACQUITY™ UPLC Clase H^®. El caudal se establece en0,4 ml/min. La temperatura de la columna se mantiene en55 °CMonitoreo de longitud de onda de absorción en260 nm. el gradiente de elución utilizado para la separación se muestra en la tabla1Se muestra. La fase móvil esR: Milli-Q^®Dilución en agua10DobleAguas AccQ-TagEluidoAyB: Aguas AccQ-etiquetaEluidoB. crear una curva de calibración para cada aminoácido, utilizandoKit estándar de alimentos y piensos de aminoácidos Waters()Waters Corporation, SKU. 186009299(derivados, con concentraciones de1, 5, 10, 25,y50 pmol/μL. las muestras fueron analizadas por regresión lineal.

Tabla1. Gradientes utilizados para la separación de aminoácidos derivados

En tercer lugar,Resultados

Imagen1. Descubre la preparaciónCantidad de ácido taurosulfónico recuperado en la degradación

Imagen2. Cantidad de ácido aminoácido recuperado de la comida para perros

4,Conclusiones

El sistema de reacción de microondas discover prep ha logrado hidrolizar los aminoácidos de los alimentos para mascotas y ha producido resultados similares a los de los hornos tradicionales. Al comparar el contenido de aminoácidos, el resultado de la degradación tradicional del horno y la degradación de discover% RSD fue inferior al 10%. Al comparar el contenido de taurina en la comida para perros, la muestra 1 fue la más alta, seguida de la muestra 2 y la muestra 3.