Células madre mesenquimales del cordón umbilical(huc - mscs) es una célula madre con capacidad de diferenciación multipotente extraída del cordón umbilical del recién nacido. Las células madre mesenquimales de origen ombligo no solo mantienen las características biológicas de las células madre mesenquimales (marcadores de antígenos de superficie, con capacidad para diferenciarse en osteoblastos, condrocitos y células grasas), sino que también son más seguras, más originales y más capaces de proliferación, diferenciación e inmunomodulación celular que las células madre mesenquimales de otras fuentes.
Además, las células madre mesenquimales del cordón umbilical también tienen las características de fácil separación, baja inmunogenicidad, sin restricciones éticas y éticas, gran número de células disponibles y producción estandarizada a gran escala, y tienen amplias perspectivas de aplicación clínica. Este producto ha sido estrictamente controlado y probado para garantizar su seguridad y eficacia.
(1) cuando la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede transmitir (preste atención a que las células no pueden ser demasiado densas, de lo contrario son fáciles de diferenciarse), abandone el cultivo de shangqing y lave las células 1 - 2 veces con dpbs sin iones de calcio y magnesio;
(2) añadir 1 ml de Tripsina recombinante al frasco de cultivo para que el líquido digestivo se infiltre en todas las células y se digiera en una incubadora a 37 ° C durante 1 - 3 minutos, observado bajo un microscopio hasta que la mayoría de las células se redondeen y se desprendan (dependiendo de la condición celular).
(3) después de la adición, se carga en un tubo centrífuga estéril, se centrifuga a 1000 RPM durante 5 minutos y se abandona en un medio de cultivo MSC de 3 ML para terminar la digestión. Mezcle suavemente el líquido claro, agregue 1 - 2ml de medio de cultivo MSC y sople bien.
(4) pasar de acuerdo con la proporción de 1: 3 o 1: 4, o inocular en un nuevo frasco de cultivo con una concentración de 5 - 8 × 103cells / cm2 después del recuento celular, complementar el volumen correspondiente del medio de cultivo MSC y cultivarlo en una incubadora de 37 ° C y 5% co2.
(5) cambiar el líquido cada 2 - 3 días, cultivar hasta que la densidad de crecimiento celular alcance alrededor del 80% en 2 - 4 días, y realizar operaciones posteriores de transmisión o criopreservación.
tiempo de digestión: la digestión de la Tripsina debe controlarse en aproximadamente 1 minuto para evitar el daño celular causado por la digestión excesiva.
densidad de vacunación: pasar de 1: 3 a 1: 4 en el área inferior para evitar la densidad excesiva o la dilución excesiva.
selección de generaciones: se recomienda usar células de generaciones bajas (como la generación p2) para garantizar el efecto experimental.
medio de cultivo especial: utilizar un medio de cultivo especial que contenga factores de crecimiento para promover la proliferación y diferenciación celular.