La columna cromatográfica es el componente central del análisis cromatográfico, y su rendimiento afecta directamente el efecto de separación y la precisión de los resultados de las pruebas. Un mantenimiento razonable puede prolongar la vida útil de la columna y evitar la disminución o el daño del rendimiento debido a una operación inadecuada. La siguiente es una guía detallada sobre el mantenimiento de columnas cromatográficas, que cubre muchos aspectos, como instalación, uso, almacenamiento y mantenimiento.

I. preparativos previos a la instalación

1. inspección visual

La nueva columna debe comprobar si la columna está intacta, sin grietas, arañazos o fugas antes de su uso.

Asegúrese de que la conexión de la columna coincide con el instrumento para evitar fugas o daños causados es es por desajustes de hilo.

2. prueba de compatibilidad de fase móvil

- antes de su uso, enjuagar la columna con un disolvente de baja viscosidad (como metanol o nitrilo) para eliminar las impurezas residuales durante el proceso de producción.

- probar la compatibilidad de la fase móvil con la columna y evitar el uso de ácidos fuertes, bases fuertes o disolventes corrosivos (como el TFA debe usarse con precaución).

3. adaptación del sistema

Asegúrese de que el valor de presión de la columna cromatográfica coincida con la presión del sistema del instrumento para evitar el colapso del lecho de la columna debido a la operación de sobrepresión.

Registrar el modelo y las especificaciones de la columna (como tamaño de partícula, tamaño de poro, cobertura c18, etc.) y usarlo estrictamente de acuerdo con las condiciones recomendadas por el fabricante.

II. mantenimiento en el uso diario

1. selección y gestión de la fase móvil

- control del ph: el rango de pH aplicable a las columnas de fase inversa (como la columna c18) es de 2 - 8, y más allá de este rango puede destruir la matriz de silicona.

- Proporción de disolvente orgánico: evitar cambios drásticos en la proporción de disolvente orgánico en la fase móvil (por ejemplo, cambiar directamente del 100% de agua al 100% de disolvente orgánico), se necesita una transición de gradiente para evitar que el lecho de la columna se contraiga o se expanda.

Filtración y desgasificación: la fase móvil debe filtrarse a través de una membrana filtrante de 0,22 micras y desgasificación por ultrasonido para evitar que las partículas pequeñas bloqueen la cama de la columna o la detección de interferencia de burbujas.

2. preprocesamiento de muestras

Las muestras deben ser centrifugadas o filtradas (película filtrante de 0,22 micras) para eliminar partículas suspendidas o precipitaciones.

Evitar la inyección directa de muestras de alta concentración y diluirlas dentro del rango de capacidad de la columna (consulte los parámetros de carga de la muestra proporcionados por el fabricante).

Las muestras complejas recomiendan el uso de columnas protectoras (columnas de guardia) para interceptar impurezas y prolongar la vida útil de las columnas Principales.

3. control de velocidad y presión

Operar estrictamente de acuerdo con el caudal recomendado por la columna, el caudal excesivo puede causar una presión excesiva en la columna y acelerar el desgaste del relleno.

- la velocidad de flujo de la columna de fase inversa convencional es de 0,5 - 2 ml / min, y la velocidad de flujo de la columna de Cromatografía líquida de ultra alta eficiencia (uhpc) puede ser tan baja como 0,1 - 0,5 ml / min.

Cuando la presión del sistema aumenta repentinamente, se detiene inmediatamente para comprobar las causas (como el bloqueo de la cabeza del pilar o la contaminación de la placa de tamiz).

4. lavado y limpieza

Después de cada uso, enjuague la columna con agua pura o un disolvente de baja viscosidad (como el metanol) durante 10 - 20 minutos para eliminar las muestras residuales o las sales.

Después de un uso prolongado, se pueden realizar operaciones de regeneración de columnas (como retroceso, limpieza a alta temperatura o regeneración química) para restaurar la eficiencia de la columna.

III. almacenamiento y custodia

1. almacenamiento a corto plazo (días a semanas)

- columna de fase inversa: conservar con metanol - agua (1: 1) o metanol puro para evitar el agrietamiento del relleno debido al secado.

- columna de fase positiva: conservar con n - hexano o cloroformo para evitar la falla de absorción de agua.

- conservar a temperatura ambiente y evitar ambientes congelados o de alta temperatura.

2. almacenamiento a largo plazo (más de 1 mes)

- retire la columna de cromatografía del instrumento y selle la antiincrustación en ambos extremos.

- conservar en un lugar fresco y seco, comprobar regularmente la estanqueidad para evitar que la volatilización del disolvente provoque grietas en el lecho de la columna.

IV. regeneración y restauración de columnas

1. operación de retroceso

- adecuado para casos en los que la eficiencia de la columna disminuye pero no falla por completo, reorganizar el relleno mediante lavado inverso para restaurar la uniformidad de la cama de la columna.

El caudal de retroceso debe ser inferior al caudal positivo (por ejemplo, 0,2 ml / min), y el tiempo debe controlarse en 10 - 30 minutos.

2. regeneración química

- columna de matriz de silicona: se puede remojar en una solución de metanol al 10% y limpiar por ultrasonido para eliminar las impurezas hidrofóbicas.

- columna de polímero: altamente tolerante y se puede lavar y regenerar con una alta concentración de disolventes orgánicos, como el nitrilo puro.

3. regeneración a alta temperatura

- adecuado para columnas cromatográficas resistentes a altas temperaturas (como la columna c18), elevar la temperatura de la columna a 50 - 60 ° c, enjuagar con metanol y disolver las impurezas liposolubles adsorbidas en el relleno.

V. problemas comunes y respuestas

1. aumento de la presión de la columna

- causas: obstrucción de la cabeza de la columna, contaminación de la placa de tamiz o colapso del relleno.

- solución: enjuagar la cabeza de la columna en sentido inverso, reemplazar la placa de tamiz o regenerar la columna.

2. la forma del pico se ensancha o arrastra la cola

- causa: envejecimiento del relleno, residuos de sitios activos o Ph inadecuado de la fase móvil.

- solución: ajustar el pH de la fase móvil, regenerar la columna o reemplazar la nueva.

3. deriva del tiempo de retención

- causa: cambio en la composición de la fase móvil, fluctuación de la temperatura de la columna o falla parcial del relleno.

- solución: comprobar la proporción de fase móvil, estabilizar la temperatura de la columna y regenerar o reemplazar la columna si es necesario.

6. precauciones

1. evitar la entrada de burbujas: las burbujas pueden destruir la estructura de la cama de la columna, lo que resulta en un aumento de los huecos de llenado y afecta el efecto de separación.

2. prohibir los disolventes incompatibles: por ejemplo, el tetrahidrofurano (thf) puede disolver la matriz de silicona y debe usarse con precaución.

3. registrar el registro de uso: rastrear el número de veces que se utiliza la columna, el tipo de muestra y las operaciones de mantenimiento para facilitar la predicción de la vida útil.