El medidor de potencia de antibióticos es el equipo central para detectar la actividad de los antibióticos por método microbiano, y su precisión operativa afecta directamente la fiabilidad de los resultados de la prueba. A continuación, se ordenan las habilidades prácticas del sistema desde cuatro aspectos: proceso de operación, habilidades clave, mantenimiento diario y manejo de fallas para ayudar a mejorar la eficiencia de la detección y la precisión de los datos.
I. procesos y habilidades de operación estandarizados
Preparación y dilución de muestras
Habilidades:
Los estándares de antibióticos deben conservarse en liofilización, utilizando un disolvente especial al volver a disolverse para evitar la atenuación de la Potencia causada por el uso de solución salina normal.
El diseño del gradiente de dilución debe cubrir entre el 50% y el 200% del título esperado, por ejemplo, al detectar muestras de 100 u / ml, se establecen tres gradientes de 50, 100 y 200 u / ML para garantizar una regresión lineal R m2 ≥ 0,99.
Evitar pozos:
Está estrictamente prohibido usar utensilios metálicos para tocar muestras para evitar la degradación catalítica de iones metálicos.
Después de la dilución, la muestra debe completarse en 30 minutos para evitar la pérdida de potencia causada por la exposición prolongada.
Preparación y esterilización de medios de cultivo
Habilidades:
Se selecciona el Agar de grado cromatográfico para garantizar un espesor uniforme de la capa bacteriana.
Después de la esterilización a alta presión, es necesario enfriarse a 50 ° C y luego invertir la placa para evitar que las altas temperaturas maten las bacterias indicadoras.
Evitar pozos:
Evite usar agua que contenga iones de calcio / magnesio para preparar medios de cultivo y evite que la formación de chelatos con antibióticos afecte la actividad.
Después de la esterilización, el pH del medio de cultivo debe ajustarse a 6,8 - 7,2, y fuera del alcance, debe reformularse.
Muestreo e incubación
Habilidades:
Con un muestreador cerámico, la cantidad de muestra se controla en 0,2 ml / agujero para evitar efectos de borde causados por la difusión de líquidos.
Las condiciones de incubación deben controlarse estrictamente en 35 - 37 ° C y la humedad ≥ 70%, que se puede mantener con una solución saturada de cloruro de sodio.
Evitar pozos:
Después de tomar la muestra, se debe dejar reposar durante 15 minutos hasta que el líquido se absorba y luego transferirlo a la incubadora para evitar que la muestra fluya.
Está prohibido abrir la Caja para la inspección durante la incubación para evitar fluctuaciones de temperatura superiores a ± 0,5 ° c.
Medición del círculo antibacteriano y análisis de datos
Habilidades:
Se adopta un sistema automático de análisis de imágenes para establecer parámetros de umbral para mejorar la precisión del reconocimiento de borde.
El procesamiento de datos requiere eliminar los valores anormales y volver a detectarlos.
Evitar pozos:
Evitar la medición bajo luz fuerte y evitar que la luz reflejada interfiera con el reconocimiento de la imagen.
Al medir manualmente, es necesario usar una pinza Vernier para medir repetidamente tres veces para tomar el promedio.
II. habilidades clave de mantenimiento
Limpieza y desinfección diarias
Operación:
Después del experimento diario, limpie la pared interior de la Mesa de muestreo y la Caja de incubación con etanol al 75% para evitar la contaminación cruzada.
Retire la aguja de muestra cada semana, limpie por ultrasonido durante 10 minutos y elimine los residuos de proteínas.
Evitar pozos:
Está estrictamente prohibido usar desinfectantes que contengan cloro para evitar la corrosión de piezas metálicas.
Después de la limpieza, es necesario enjuagar con agua pura tres veces para evitar que los residuos de etanol afecten los experimentos posteriores.
Mantenimiento del sistema óptico
Operación:
Limpie la lente de la cámara con un paño sin polvo cada mes y use aire comprimido para soplar el polvo del sensor.
Calibrar la intensidad de la fuente de luz trimestralmente para garantizar un contraste de imagen ≥ 90%.
Evitar pozos:
Evite tocar la lente directamente y evitar la contaminación de las huellas dactilares.
La calibración debe realizarse en una cámara oscura para evitar interferencias de luz ambiente.
Mantenimiento de piezas mecánicas
Operación:
Lubricar la Guía del muestreador trimestralmente para reducir la resistencia al movimiento.
Reemplazar la tira de sellado de la incubadora cada año para evitar fluctuaciones de temperatura causadas por fugas de calor.
Evitar pozos:
Está prohibido usar aceite para lubricar para evitar la contaminación de los medios de cultivo.
Después de reemplazar la tira de sellado, es necesario realizar una prueba de operación sin carga de 24 horas para confirmar la estabilidad de la temperatura.
3. fallas y soluciones comunes
| Fenómeno de falla |
posibles causas |
solución |
| El borde del círculo antibacteriano es inexistente. |
Espesor desigual del medio de cultivo |
Volver a invertir la placa y calibrar la Mesa de operaciones con un medidor de nivel |
| El número de muestras es inestable. |
Bloqueo de la aguja de muestra |
Limpiar la aguja por ultrasonido y reemplazar la película filtrante de 0,45 micras |
| Fluctuación de la temperatura de incubación > ± 1 ℃. |
Falla del sensor de control de temperatura |
Reemplazar el Termistor NTC (precisión ± 0,1 ° c) y calibrar los parámetros de la EIP |
| Tasa de error de reconocimiento de Imagen superior al 5% |
Atenuación de la fuente de luz |
Reemplazar el tablero de Luz LED (vida útil ≥ 50.000 horas) y ajustar la distancia focal de la Cámara |
| CVS repetitivo experimental superior al 10% |
Error de dilución de la muestra |
Utilice el kit de calibración del pipeta (precisión ± 0,5%) para estandarizar el proceso de operación |
IV. puntos clave de verificación del rendimiento y control de calidad
Prueba de idoneidad del sistema
Antes de cada lote de experimento, es necesario operar el estándar, que requiere que el diámetro del círculo antibacteriano CVS ≤ 5% y la regresión lineal RM2 ≥ 0,98.
La verificación de precisión intermedia se realiza mensualmente y los diferentes operadores completan cinco pruebas repetidas en tres días, con resultados RSD ≤ 8%.
Gestión de la trazabilidad de datos
La imagen original debe guardarse en formato tiff y asociarse con el registro experimental.
Utilice el sistema LIMS para generar automáticamente informes de potencia para evitar errores de entrada manual.
Cumplimiento de la normativa
Cumplir con los requisitos de los cuatro principios generales 1431 de la edición 2020 de la Farmacopea China y aceptar regularmente la calibración del Departamento de medición.
Conservar todos los registros de control de calidad durante al menos 5 años para referencia.
V. técnicas avanzadas de optimización
Actualización de automatización
Acceda al sistema de muestreo robótico para reducir el tiempo de muestreo de 15 minutos por placa a 3 minutos y reducir el error humano.
Utilizando el algoritmo de reconocimiento de imágenes ai, se eliminan automáticamente los círculos antibacterianos anormales y se mejora la eficiencia del procesamiento de datos.
Control ambiental
Se instala un sensor de CO2 en la incubadora para simular las mejores condiciones de crecimiento de los microorganismos.
El uso de laboratorios libres de polvo reduce el riesgo de contaminación.
Gestión de consumibles
Se seleccionan tabletas de medio de cultivo esterilizadas para reducir el error de uso actual.
Utilice una aguja de muestra desechable para evitar la contaminación cruzada.