El detector de fluorescencia por Cromatografía líquida (fld) es un detector de alta sensibilidad y alta selectividad adecuado para compuestos que pueden producir fluorescencia o sustancias que emiten luz después de la derivación. Su ventaja central es que la sensibilidad puede alcanzar muchas veces el detector ultravioleta y la capacidad de anti - interferencia es Fuerte.
El mecanismo de trabajo del detector fluorescente se basa en el fenómeno de fotoluminiscencia, y los pasos centrales son los siguientes:
Las fuentes de iluminación de luz estimulada (comúnmente lámparas de xenón, lámparas de mercurio o diodos láser) emiten excitación de una longitud de onda específica, seleccionando una sola ola de haces de excitación de larga duración a través de monocromadores (rejillas o filtros), centrándose en el líquido de salida de la columna cromatográfica (piscina de detección). Cuando las moléculas de los componentes a medir absorben la energía de luminiscencia, saltarán del Estado del suelo (estado estable) al Estado estimulado (estado de alta energía).
La inestabilidad molecular en la que se emite la fluorescencia en un Estado estimulado pierde parte de la energía a través de una transición no radiativa en muy poco tiempo (10 a 10 segundos), vuelve al nivel de energía de baja vibración del Estado estimulado, luego libera fotones a través de una transición radiativa y vuelve al Estado del suelo. la luz generada por Este proceso es la fluorescencia. La longitud de onda de la fluorescencia siempre es mayor que la longitud de onda de la luz estimulada (desplazamiento de stokes), que es una característica clave de la detección de fluorescencia.
La adquisición y conversión de señales para evitar la interferencia de la luminiscencia, el sistema de recepción de fluorescencia del detector (fotomultiplicador PMT o fotodetector) generalmente se coloca en un ángulo de 90 ° con el camino de la luz estimulada. Después de que la fluorescencia emitida es seleccionada por el monocromador para la longitud de onda de fluorescencia característica, es recibida por el Fotodetector y convertida en señal eléctrica. La intensidad de la señal eléctrica tiene una relación lineal con la concentración de los componentes a medir dentro de un cierto rango, y luego se amplifica y procesa los datos para obtener picos cromatográficos y resultados cuantitativos.
Proceso de detección:
Las fuentes de luz estimuladas (como las lámparas de xenón o los láseres) emiten espectros continuos y seleccionan una longitud de onda específica como excitación después de la División de la luz por un monocromador.
Estimular la luz para irradiar el material fluorescente en la piscina de muestras y producir fluorescencia.
La señal fluorescente es detectada por elementos fotosensibles (como tubos fotomultiplicadores) a través de un camino óptico en ángulo recto (para evitar interferencias luminiscentes) y convertida en señal eléctrica.
Después de amplificar, la señal eléctrica se transmite al sistema de procesamiento de datos para generar un mapa de color.
Los detectores de fluorescencia de Cromatografía líquida se han convertido en una herramienta importante para el análisis de trazas con su alta sensibilidad y alta selectividad, especialmente adecuados para los campos biológico y ambiental. Sin embargo, su no versatilidad y sensibilidad a las interferencias limitan el alcance de la Aplicación. Al combinar fuentes de luz láser, técnicas combinadas o métodos derivados, se puede ampliar aún más su capacidad de análisis para satisfacer las necesidades de detección de muestras complejas.