El medidor de proteína de ácido nucleico es un equipo clave en el laboratorio de biología molecular para la cuantificación rápida de ácidos nucleicos (adn / arn) y concentraciones de proteínas. El funcionamiento correcto no solo garantiza la precisión de los datos, sino que también prolonga la vida útil del instrumento. Este artículo presentará a los novatos del laboratorio las especificaciones básicas de funcionamiento, los problemas comunes y las habilidades prácticas del medidor de proteínas de ácido nucleico.
I. preparativos previos a la operación
1. calibración del instrumento
- calibración en blanco: antes de cada uso, es necesario realizar una calibración en blanco con agua ultrapura o un amortiguador (como El amortiguador te) para eliminar la interferencia de fondo.
Mantenimiento regular: si el instrumento no se utiliza durante mucho tiempo, es necesario recalibrar y comprobar si la fuente de luz y el detector son normales.
2. preparación de muestras
- muestra de ácido nucleico: asegúrese de que no haya partículas ni impurezas y, si es necesario, centrifugar (12000 rpm, 1 - 2 minutos) para eliminar las impurezas.
- muestras de proteínas: evite las altas concentraciones de descontaminantes (como sds) para evitar afectar a las pruebas de absorción.
3. elija el modo de detección adecuado
- método de absorción ultravioleta (como nanodrop): adecuado para la determinación rápida de ADN / ARN (260 nm) y proteínas (280 nm).
- método de fluorescencia (como qubit): adecuado para pruebas de ácido nucleico de baja concentración, con mayor sensibilidad.
II. procesos operativos estándar
1. encendido e iniciación
- abrir el instrumento y precalentar durante 5 - 10 minutos (algunos equipos tardan más en calentarse).
- selección del modo de detección correspondiente (ácido nucleico / proteína).
2. adición de muestras y pruebas
1. limpiar la Plataforma de detección: sumergir una pequeña cantidad de agua ultrapura o etanol en papel sin polvo para limpiar la superficie de detección y evitar la contaminación residual.
2. añadir muestras:
Instrumentos de clase nanodrop: gotear 1 - 2 μl de muestra en la Mesa de detección y bajar el brazo de detección.
- instrumento tipo placa de petri: asegúrese de que la placa de Petri esté limpia y agregue una muestra adecuada (generalmente 50 - 200 micras l).
3. lectura: haga clic en "medida" para registrar los datos.
4. limpieza: después de la prueba, limpie la Mesa de prueba con agua ultrapura o etanol inmediatamente para evitar que la cristalización de la muestra afecte la prueba posterior.
3. registro y análisis de datos
- juicio de pureza del ácido nucleico:
- adn: a260 / A280 ¿ 1,8 (adn puro), a260 / a230 > 2,0 (sin contaminantes).
- arn: a260 / A280 ¿ 2,0 (arn puro).
- si la relación es anormal (por ejemplo, a260 / A280 < 1,6), puede indicar contaminación por proteínas o fenoles.
- determinación de proteínas: cuando se utiliza el método Bradford o bca, es necesario hacer una curva estándar.
III. problemas y soluciones comunes
1. resultados anormales de la prueba (por ejemplo, la relación a260 / A280 es baja)
- posibles causas: contaminación por proteínas o disolventes orgánicos.
- solución: volver a purificar la muestra o cambiar a un método cuantitativo fluorescente (como el qubit).
2. error del instrumento (como "sampletooconcentrado")
- posible causa: la concentración de la muestra excede el rango de detección.
- solución: volver a probar después de diluir la muestra.
3. deriva o inestabilidad de la línea de base
- posibles causas: contaminación de la Mesa de detección o envejecimiento de la fuente de luz.
- solución: limpiar el Banco de pruebas o contactar con el ingeniero para calibrar la fuente de luz.
IV. habilidades prácticas
1. evite la interferencia de la burbuja: al agregar la muestra, asegúrese de que la gota esté completa y libre de burbujas, de lo contrario causará fluctuaciones de absorción.
2. detección de muestras de baja concentración:
- el uso de métodos fluorescentes cuantitativos (como el qubit), más sensibles que el método ultravioleta.
- si es necesario utilizar el método ultravioleta, se puede aumentar adecuadamente el volumen de la muestra (por ejemplo, 2 micras l → 3 micras l).
3. recomendaciones de almacenamiento a largo plazo:
- encender al menos una vez a la semana para evitar la humedad de los elementos ópticos.
- conservar en un ambiente seco y sin polvo.