La columna inversa puede encontrar múltiples fallas durante su uso, y las siguientes son las soluciones para estas fallas:

I. aumento anormal de la presión

1. bloqueo de la placa de tamiz

- rendimiento: aumento o fluctuación significativo de la presión de la columna.

- solución: quitar la placa de tamiz, colocarla en ácido nítrico diluido al 10% y limpiarla por ultrasonido durante 10 minutos, enjuagarla con agua pura y reinstalarla. También se puede lavar en sentido inverso con un fuerte disolvente. Preste atención a evitar choques positivos de alta presión.

2. contaminación por rellenos

- rendimiento: el relleno de la columna está cubierto por una sustancia fuertemente conservada, lo que resulta en una disminución de la eficiencia de la columna.

- solución: desenrosque la Junta de la columna, desenterre el relleno contaminado superficial, reemplace por un nuevo relleno y compacta. Este método puede restaurar parcialmente la eficiencia de la columna, pero es difícil alcanzar el nuevo nivel de la columna.

3. precipitación de cristalización de sal

- manifestación: cuando la fase móvil contiene una alta concentración de disolvente orgánico, la cristalización de sal tampón bloquea el camino de flujo.

- solución: primero disuelva la sal con una baja concentración de metanol / agua y luego cambie a la fase orgánica de alta concentración para enjuagarla.

II. disminución del efecto de separación

1. anomalía de la forma del pico

- arrastre / bifurcación: debido al colapso del estigma o al aumento del volumen muerto, es necesario rellenar el mismo tipo de relleno y aplanar. Si debido a la contaminación metálica, se cambia a una columna de silicona de alta pureza.

- pico fantasma: los contaminantes residuales salen a altas temperaturas y se pueden eliminar aumentando la temperatura final y horneando la columna.

2. reducción de la eficiencia de la columna

- causa: pérdida de fase fija o disolución de silicona.

- solución: optimizar el pH de la fase móvil (recomendaciones 2 a 9) y evitar condiciones alcalinas para acelerar la degradación de la fase de unión.

III. deriva del tiempo de retención

1. equilibrio insuficiente: después de cambiar la fase móvil, se introduce un equilibrio de volumen de al menos 10 a 20 veces la columna.

2. colapso hidrofóbico: el funcionamiento a largo plazo de la fase de agua de la columna C18 causará contracción de los poros y requiere la inyección de una fase orgánica del 5% para recuperarse.

IV. estrategias de mantenimiento preventivo

1. estandarizar el proceso de operación

Evitar cambios repentinos de presión y abrir y cerrar la válvula lentamente.

El cambio de fase móvil requiere una transición de gradiente y está prohibido pasar directamente de la fase orgánica a la fase de agua pura.

2. limpieza profunda regular

Lavado convencional: enjuagar a su vez con 95% de agua - 5% de metanol → metanol puro → propanol, al menos 10 veces el volumen de la columna por disolvente

Contaminantes obstinados: los residuos de proteínas se seleccionan Dmso y los almidones se eluden con agua.

3. optimización de las condiciones de almacenamiento

- cuando no se utilice durante mucho tiempo, la columna está llena de metanol o nitrilo, apriete la conexión para evitar el secado (...). Está prohibido permanecer en el amortiguador durante la noche.

La solución de la falla de la columna cromatográfica inversa debe combinarse con el lavado físico, la regeneración química y las especificaciones de operación. Se da prioridad a eliminar los factores no cilíndricos (como el bloqueo del instrumento) y luego tratar específicamente los problemas de la columna cromatográfica en sí. Establecer un registro de mantenimiento completo para registrar las condiciones de lavado, los cambios de presión y los resultados de las pruebas puede prolongar significativamente la vida útil de la columna.