Como componente central del sistema de análisis cromatográfico, la selección de columnas cromatográficas afecta directamente la eficiencia de la separación, la precisión del análisis y el ciclo de desarrollo del método. Los puntos clave para la compra de columnas cromatográficas se exponen a continuación desde múltiples dimensiones:
I. aclarar las necesidades experimentales y los objetivos de análisis
- posicionamiento del propósito del análisis
El análisis cualitativo requiere una alta separación y eficiencia de la columna, dando prioridad a las columnas cromatográficas con un alto número de placas teóricas;
El análisis cuantitativo se centra en la repetibilidad y la estabilidad, y se deben seleccionar modelos con buena reproducibilidad entre lotes;
La preparación de la cromatografía requiere una alta carga de muestras y se recomienda columnas de gran diámetro interior (por ejemplo, más de 10 mm) y rellenos de gran tamaño de partícula.
- Adaptación de la naturaleza de la muestra
Compuestos polares no / débiles: columnas C18 o C8 de fase inversa;
Compuestos polares fuertes: se pueden elegir columnas de fase positiva o columnas de fase inversa modificadas polares;
- sustancias iónicas: mediante columnas de intercambio de iones;
- biomacromoles: se requiere una descarga de tamaño de gran tamaño de Poro (≥ 300) o una columna de gel especial.
II. evaluación de los parámetros básicos de rendimiento
- Optimización de parámetros físicos
- longitud de la columna y diámetro interior: los análisis convencionales suelen ser de 150 mm x 4,6 mm, y las muestras complejas se pueden extender a 250 mm para mejorar la separación, pero hay que sopesar la presión de la columna y el costo del tiempo;
- tamaño de las partículas de relleno: 5 μm es adecuado para la clar convencional, por debajo de 3,5 μm se adapta a la fase líquida de ultra alta eficiencia (uplc), la reducción del tamaño de las partículas puede mejorar la eficiencia de la columna pero aumentar la contrapresión;
- selección de poros: las moléculas pequeñas ( < 1000da) son adecuadas para 80 - 120 y las moléculas grandes (como las proteínas) necesitan más de 300 para garantizar la libertad de difusión.
Indicadores de rendimiento químico
- pureza del silicona: el silicona de alta pureza puede reducir el arrastre de compuestos alcalinos causados es es por impurezas metálicas;
Proceso de unión: la Unión de monómeros se transfiere rápidamente y la estabilidad de la Unión de polimerización es alta; La cobertura de carbono afecta la capacidad de retención, y la alta carga de carbono es adecuada para sustancias no polares;
Tratamiento de sellado final: reducir la interferencia del Grupo hidroxi de silicio residual y mejorar la forma del pico de compuestos polares.
III. instrumentos de emparejamiento y condiciones de funcionamiento
Verificación de la compatibilidad del dispositivo
- cromatógrafo líquido: confirmar si la presión máxima de la bomba cumple con los requisitos de la columna de pequeño tamaño de partícula;
- cromatógrafo de gases: se debe verificar la estanqueidad de la entrada de la muestra y la precisión del control de temperatura de la Caja de temperatura de la columna].
- fase móvil y rango de pH
- columna de matriz de silicona: el rango de tolerancia al pH estándar es de 2 - 8, que se puede ampliar a 1 - 12 después de una modificación especial;
- columna de polímero: adaptabilidad de pH ancho (1 - 14), pero se debe prestar atención a los problemas de hinchazón causados es es por disolventes orgánicos.
IV. consideración de la relación calidad - precio y el mantenimiento a largo plazo
Análisis coste - beneficio
Columna de alto rendimiento: aunque el precio unitario es alto, la vida útil es larga y la eficiencia de separación es alta, lo que es adecuado para pruebas de alta frecuencia;
Mecanismo de prueba: probar el efecto real de separación a través de pequeñas muestras proporcionadas por el proveedor para evitar compras ciegas.
Diseño de conveniencia de mantenimiento
- control de la contaminación: elija rellenos fáciles de limpiar (como partículas esféricas) y enjuague regularmente con un fuerte disolvente;
- modo de almacenamiento: la suspensión a corto plazo se puede remojar en alcohol para la conservación, y la ociosidad a largo plazo requiere almacenamiento seco y sellado.
V. evitar malentendidos comunes
Rechazar la "teoría de la marca": los pilares nacionales han logrado la sustitución de importaciones en algunas áreas, y es necesario comparar los parámetros en lugar de mirar simplemente el origen;
- Cuidado con la trampa "universal de una columna": las columnas del mismo tipo (como c18) pueden tener resultados muy diferentes debido a las diferencias en el proceso de unión y deben seleccionarse de manera específica.