La siguiente es una descripción detallada del método de instalación de la columna de cromatografía líquida:
Preparación previa
Verificar el Estado del instrumento: encender el cromatógrafo de líquidos, confirmar que el sistema no tiene indicaciones de alarma y que cada componente funciona normalmente. Se presta especial atención a la estabilidad de la presión de la bomba y la estabilidad de la línea de base del detector, que es un requisito previo para la instalación y el uso posteriores.
Comprobar la apariencia de la columna: la nueva columna de Cromatografía líquida suele ir acompañada de un informe de inspección de fábrica y un certificado de conformidad. Compruebe si hay daños, grietas, etc. en el cuerpo de la columna cromatográfica, especialmente en las partes de unión en ambos extremos de la columna, y si se encuentran problemas, debe reemplazarlos a tiempo. Al mismo tiempo, se registra el modelo de columna, el número de serie y otra información para consultas posteriores y uso de mantenimiento.
Pasos de instalación
1. fase móvil residual del sistema de vaciado: drenar el flujo original en el interior del instrumento a través de una válvula de paso múltiple, etc., evitando mezclar con el disolvente de conservación en la nueva columna cromatográfica para producir sustancias precipitadas o perturbadoras. La bomba se puede activar para funcionar a un caudal más bajo durante un período de tiempo para lograr esta operación.
2. conecte la columna cromatográfica: determine la dirección de importación y exportación de la fase móvil de la columna colorida (en general, el fabricante tendrá una identificación clara en la columna cromatográfica). Conecte cuidadosamente un extremo de la columna a la línea detrás del muestreador y el otro extremo a la línea frente al detector. Al conectarse, asegúrese de que la interfaz esté estrechamente ajustada. el método común es apretar primero la tuerca de la boquilla a mano y luego reforzarla adecuadamente con la ayuda de una llave inglesa, pero preste atención a la intensidad moderada para evitar daños en la conexión de la columna cromatográfica.
3. enjuague inicial: después de la instalación, seleccione el flujo inicial adecuado en relación con la columna cromatográfica para enjuagar. Para las columnas de fase inversa, a menudo se selecciona una alta proporción de soluciones mixtas de agua y disolvente orgánico como fase móvil inicial. Establecer un caudal más bajo para que la fase móvil fluya lentamente a través de la columna cromatográfica, con el objetivo de reemplazar el disolvente de conservación restante en la columna, humedeciendo al mismo tiempo la superficie del relleno de fase fija y excluyendo burbujas de aire].
4. columna de equilibrio: después del lavado inicial, se cambia a la fase móvil objetivo para la operación de equilibrio antes del análisis. Deje que la columna alcance un Estado estable en la fase móvil objetivo y observe los cambios de presión y la situación basal. Cuando la presión es estable y la línea de base tiende a nivelarse, indica que la columna está básicamente equilibrada y que se puede realizar el análisis de la muestra.
Precauciones
- evitar la introducción de burbujas de aire: durante todo el proceso de instalación se debe prestar especial atención a evitar que el aire entre en la columna. Debido a que las burbujas pueden ocupar el espacio interior de la columna, afectando el efecto de separación del soluto, también puede causar daños locales a la columna por alta presión. Por lo tanto, durante el proceso de conexión de la tubería y lavado, siempre hay que prestar atención a si se producen burbujas de aire y, si hay, eliminarlas a tiempo.
- controlar el caudal y la presión: al principio de enjuague y equilibrio, no es apropiado utilizar un caudal excesivo para evitar aflojar o desplazar la cama de la columna debido a un impacto repentino de alta presión. A medida que la columna se adapta gradualmente al entorno de fase móvil, el caudal se ajusta al rango adecuado de acuerdo con la situación real.
A través de los pasos de instalación y precauciones de las especificaciones anteriores, se puede garantizar la instalación y el uso correctos de la columna de cromatografía líquida, sentando las bases para obtener resultados de análisis precisos y confiables.