La compra de columnas cromatográficas ACE debe guiarse por objetivos de separación, sopesando exhaustivamente las características de la fase fija, los parámetros físicos y las restricciones del sistema. Se recomienda dar prioridad a la evaluación de la naturaleza de la muestra y el objetivo de separación, luego emparejar la fase fija correspondiente y verificar el plan de optimización a través de experimentos.
La siguiente es una descripción de los requisitos de compra para las columnas de ace:
I. aclarar los objetivos de aplicación y las características de la muestra
Propiedades de los analistas
Polaridades y solubilidades: si es necesario conservar compuestos polares fuertes (como polipéptidos y azúcares), se prefiere la fase fija de bloques hidrofílicos; Las muestras hidrofóbicas (como las vitaminas liposolubles) son adecuadas para columnas C18 - HL con alta carga de carbono.
Acidez, alcalinidad y estabilidad: los compuestos alcalinos son propensos a tener una acción secundaria con grupos hidroxi de silicio, lo que conduce a picos y colas. Se deben seleccionar fases fijas ultrainertes (como la serie c18), que reducen los residuos de grupos hidroxi de silicio y mejoran el efecto de separación mediante un tratamiento de inactivación alcalina.
Demanda del modo de separación
Cromatografía de fase inversa: selección rutinaria de columnas C18 o c8; Si es necesario mejorar la selectividad de los compuestos aromáticos, se puede seleccionar una columna de benceno.
Flexibilidad en el desarrollo del método: para mezclas complejas (como los isómeros), las columnas C18 - ar o C18 - PFP fusionan dos ventajas de fase de unión, proporcionando selectividad diferenciada.
II. selección de parámetros físicos básicos
Tamaño de las partículas y efecto de la columna
Tamaño de partícula ≤ 3 μm: adecuado para uhpc, la eficiencia de la columna es la más alta, pero la presión de espalda aumenta significativamente.
Tamaño de las partículas de 5 micras: teniendo en cuenta la eficiencia de la columna y la compatibilidad del sistema, es una opción común para clar.
≥ 10 micras de tamaño de partícula: para cribado rápido o separación de grado de preparación.
Diseño del tamaño de la columna
Longitud: 150 mm es una opción de equilibrio convencional, 250 mm es adecuado para muestras complejas y columnas cortas se utilizan para la separación de alta velocidad.
Diámetro interior: 4,6 mm para el análisis estándar, 2,1 mm para el análisis traza y más de 10 mm para el nivel de preparación.
Adaptabilidad del agujero
100: adecuado para moléculas pequeñas (peso Molecular inferior a 1000 da).
300: los grandes poros apoyan la separación de proteínas, polipéptidos y otras macromoléculas biológicas.
3. consideraciones de compatibilidad y operación del sistema
Adaptabilidad del equipo
Sistema uhpc: se debe seleccionar una columna rellena sub2 μm para soportar la Alta presión.
Preparación de clar: selección de columnas de gran diámetro interior para reducir el riesgo de bloqueo.
Restricción de fase móvil
Condiciones de alta fase acuática: la columna C18 - AQ utiliza la tecnología de incrustación polar para inhibir la hidrofílica y mantener una retención estable.
Ph: evite el uso de columnas de matriz de silicona tradicionales y elija partículas híbridas o columnas de polímero.