Al seguir estrictamente las especificaciones de operación anteriores, se puede aumentar significativamente la densidad de bacterias (generalmente hasta od600 = 8 - 12), el rendimiento del producto y la vida útil del equipo. En la práctica, es necesario establecer un proceso estandarizado combinado con las características fisiológicas específicas de la CEPA y hacer un buen trabajo de registro de operación para rastrear y optimizar.

Los siguientes son los detalles de uso y las explicaciones de los puntos clave de la mecedora de bacterias líquidas:

I. preparación previa y tratamiento de contenedores

1. selección y esterilización de envases

Se prefiere una botella triangular (250 - 500ml comúnmente utilizada) o un fermentador deflector, que se carga en una proporción no superior al 70% del volumen del recipiente en función del volumen de cultivo. La cristalería necesita ser esterilizada a vapor a alta presión a 121 ° C durante 30 minutos, y las botellas de plástico pueden ser fumigadas y esterilizadas con óxido de etileno para evitar que los inhibidores residuales afecten el crecimiento de las bacterias.

2. preparación de medios de cultivo

Configurar el medio de cultivo adecuado de acuerdo con las características de la CEPA (como el medio LB para E. coli) y ajustar el pH inicial (bacterias generales pH 6.8-7.2, hongos ácidos). Si es necesario enriquecer metabolitos específicos, se pueden agregar inductores o precursores.

II. normas de vacunación y carga

1. operación estéril

Complete la vacunación en el Gabinete de bioseguridad, retire el tapón de algodón después de quemar la boca del frasco con una llama, conecte la CEPA adecuada (la cantidad de vacunación es de aproximadamente 5% - 10%), cierre rápidamente y pase a la mecedora a través de la ventana de transmisión. Tenga en cuenta que la duración de la operación se controla dentro del rango efectivo de la llama de la lámpara de alcohol.

2. carga equilibrada simétrica

Coloque el recipiente que contiene el líquido bacteriano simétricamente en la mecedora para garantizar una carga equilibrada. La carga excéntrica puede causar vibraciones anormales del motor y acortar la vida útil mecánica. Se recomienda usar bloques de peso para llenar las vacantes durante el cultivo de gran capacidad.

3. configuración y monitoreo de parámetros

1. control de temperatura

De acuerdo con el ajuste de la temperatura de crecimiento óptima de la CEPA (como moho 30 ° C y bacterias termofílicas 55 ° c), se inicia la función de precalentamiento para que la diferencia de temperatura en la cavidad sea ≤ 0,5 ° c. Durante un largo período de funcionamiento, la temperatura real se verifica cada 4 horas para evitar la muerte de bacterias causada por un fallo de control de temperatura.

2. ajuste de velocidad

Teniendo en cuenta la eficiencia del oxígeno disuelto y el daño por esfuerzo de corte: las bacterias aeróbicas comunes se establecen en 200 - 300rpm, y los hongos filamentosos se pueden ajustar por debajo de 150 rpm; El cultivo anaeróbico debe reducirse a 80 - 120rpm y cargar nitrógeno para reemplazar el gas. Observar la producción de espuma y agregar defoamer si es necesario.

3. gestión de los procedimientos de tiempo

Se adopta la estrategia de control de tiempo segmentado: el período de retraso (0 - 6h) se adapta a baja velocidad, el período logarítmico aumenta a la velocidad objetivo y el período estable disminuye la velocidad para prolongar la etapa de producción de enzimas / esporas. Establezca un procedimiento de desaceleración con 15 minutos de antelación para evitar que el paro repentino provoque un impacto de vórtice.

IV. gestión de los procesos operativos

1. inspección de Estado

Compruebe los siguientes artículos cada hora: ① si el dispositivo de fijación está suelto; ② fluidez de la salida de agua condensada; ③ cambio de altura de la superficie del líquido en la botella (juzgar la tasa de evaporación); ④ aparición de ruidos o olores anormales.

2. controlar el momento de la reposición

Se utiliza una estrategia de flujo intermitente para complementar la fuente de carbono / nitrógeno a través de un tubo de silicona estéril cuando el electrodo do muestra una caída repentina de oxígeno disuelto. El volumen de reposición no supera el 10% del volumen de trabajo en una sola vez, evitando cambios repentinos en la presión osmótica.

3. prevención y control de la contaminación

Se encontró que el aumento anormal de la turbidez terminó inmediatamente el cultivo, y la microscopía de las muestras confirmó la contaminación. En caso de contaminación grave, primero se debe limpiar la pared interior de la mecedora con un desinfectante, y luego se debe irradiar con rayos ultravioleta durante 30 minutos antes de continuar usándola.

V. cosecha y tratamiento posterior

1. técnicas de muestreo

Utilice el método de sifón o el muestreo lateral de la jeringa para evitar perturbar el sedimento inferior. El pesaje antes y después del muestreo registra cambios en el peso húmedo y convierte la curva de acumulación de biomasa.

2. tratamiento de residuos

El recipiente a presión debe reducirse la presión arterial antes de abrirse, y los cultivos que contienen factores patógenos deben inactivarse a 121 ° C durante 30 minutos antes de descargarse. Las plantillas metálicas se remojaron y desinfectaron con etanol al 75%, y las piezas plásticas se reemplazaron por bolsas de basura especiales para sellarlas y descartarlas.

3. mantenimiento del equipo

Limpiar el polvo acumulado en el filtro del ventilador todos los meses y revisar la elasticidad del cinturón de transmisión trimestralmente. Drenar el tanque de agua y aplicar grasa de silicona para evitar la corrosión cuando no se utiliza durante mucho tiempo, y cubrir la pantalla digital con una cubierta protectora a prueba de polvo.