I,Sintético de péptidosPrincipios técnicos: la lógica central de la síntesis de péptidos de fase sólida (spps)

El aparato de síntesis de péptidos se basa en el método de síntesis de péptidos de fase sólida (spps) propuesto por Bruce Merrifield en 1963, cuyo núcleo es completar la extensión de la cadena de péptidos mediante la fijación del extremo C del aminoácido al portador de resina y la adición sucesiva de aminoácidos protegidos por el extremo N. Los pasos específicos son los siguientes:

Pretratamiento de resina

Elija un portador sólido adecuado (como rink amide resin), use una resina de hinchazón de Diclorometano (dcm), retire las impurezas y seque para su uso posterior.

Desprotección

Eliminar el Grupo protector fmoc del aminoácido anterior con un disolvente alcalino, como una solución de hexahidropiridina / DMF al 20%, exponiendo el aminoácido para participar en la siguiente reacción.

Reacción de acoplamiento

Los nuevos aminoácidos (protección del extremo n) se mezclan con reactivos activados (como hbtu, dcc) para formar un éster activo y luego se ponen en el reactor para unirse a los aminoácidos desprotegidos para formar un enlace péptido.

Lavado y purificación

Después de cada paso de la reacción, se lava con dmf, metanol y otros disolventes para eliminar las materias primas y subproductos no reaccionados y reducir la acumulación de impurezas.

Craqueo y liberación

Después de la síntesis, el péptido se corta de la resina con un lisado como el ácido trifluoroacético (tfa) y el péptido grueso se obtiene mediante precipitación, centrifugación y secado con éter.

Ventajas tecnológicas:

Operación automatizada: reducir los errores laborales y mejorar la repetibilidad.

Purificación de alta eficiencia: el portador de fase sólida facilita la separación y evita pasos complejos de purificación de intermediarios en la síntesis de fase líquida.

Producción a gran escala: apoyar la síntesis de miligramos a gramos para satisfacer las necesidades de investigación y desarrollo de medicamentos.

II. componentes y funciones clave: la base de hardware del control de precisión

El diseño de hardware del sintético de péptidos afecta directamente la eficiencia de síntesis y la pureza del producto. los componentes centrales incluyen:

Reactor

Material: vidrio o polipropileno, resistente a la corrosión química.

Capacidad: cubrir 30 μmol (investigación a pequeña escala) a resina 3G (producción industrial).

Diseño multicanal: soporte para la síntesis paralela de 2 / 4 / 6 canales para mejorar la capacidad de alto rendimiento.

Sistema de transporte de disolventes

Módulo de transporte automático: control preciso de la velocidad de flujo de disolventes como DMF y DCM (error inferior al 1%).

Protección contra gases nobles: aislar el oxígeno a través de nitrógeno / Argón para evitar la oxidación de aminoácidos.

Módulo de control de temperatura

Precisión: + 0,5 ° c, reduciendo los efectos secundarios de la racemización.

Rango: temperatura ambiente a 60 ℃, adecuado para las condiciones de eliminación de diferentes grupos protectores.

Sistema de detección y control

Monitoreo ultravioleta: detección en tiempo real de la absorción del líquido de reacción y juicio del punto final de desprotección / acoplamiento.

Análisis de espectrometría de masas: se puede seleccionar la espectrometría de masas en línea para confirmar la estructura del producto en cada paso.

En tercer lugar,Sintético de péptidosProceso de operación: toda la cadena desde la preparación del reactivo hasta la purificación del producto

Calibración y preparación del equipo

Compruebe que el cilindro de almacenamiento de disolvente está conectado a la tubería de gas para asegurarse de que no hay fugas.

Calibrar la temperatura, la presión, la aguja de extracción de líquido y otros parámetros, y ejecutar el procedimiento de autoinspección.

Preparación de reactivos y materiales

Pesar aminoácidos, reactivos de activación (como hbtu), disolventes (dmf, dcm).

Añadir la resina al reactor y bombearla seca después de la hinchazón con dcm.

Configuración del programa sintético

Introduzca la secuencia de péptidos y establezca las condiciones de reacción (temperatura, tiempo, proporción de disolvente).

Ejemplo: fmoc desprotegido (20% Piperidina / dmf, 5 minutos x 2 veces); Reacción de acoplamiento (3 veces exceso de aminoácidos, 1 hora).

Síntesis automatizada

Iniciar el programa y el instrumento completa automáticamente el ciclo de desprotección, acoplamiento y lavado.

Monitorear el proceso de reacción, como la absorción ultravioleta estable y pasar al siguiente paso.

Craqueo y purificación de productos

Agregue el lisado (tfa / agua / triapropilsilano = 95: 2,5: 2,5) y revuelva a temperatura ambiente durante 2 horas.

Filtrar para eliminar la resina y concentrar el lisado para precipitar el péptido grueso con éter.

Los polipéptidos de alta pureza (> 95%) se obtuvieron mediante purificación por Cromatografía líquida de alto rendimiento (clar).