I,Sintético de péptidos totalmente automáticoCalibración y preparación del equipo
Instalación y puesta en marcha
El personal profesional y técnico realiza la instalación y puesta en marcha del equipo para garantizar que el equipo pueda funcionar correctamente.
Compruebe si el cilindro de almacenamiento de disolvente está bien conectado con la tubería de gas y si todas las partes del instrumento están intactas.
Encienda el interruptor de alimentación del sintético y el interruptor de aire comprimido para comprobar si la presión cumple con el rango (por ejemplo, la presión del medidor "air" es superior a 60 PSI y inferior a 100 psi; La presión del medidor "n2" es superior a 5 PSI y inferior a 10 psi).
Calibración y pruebas
Calibrar y probar el equipo de acuerdo con las instrucciones del fabricante para garantizar que todos los sistemas (como bombas, válvulas, detectores, etc.) funcionen correctamente.
Realizar pruebas de temperatura, Código de barras, agitación Mixta del reactor, aguja de extracción de líquido y botella de empuje de aminoácidos; Prueba de válvula electromagnética; Calibración de flujo de botellas de reactivos químicos y botellas de aminoácidos; Calibración de control ultravioleta.
Selección del recipiente de reacción adecuado
Elija el recipiente de reacción adecuado en función de la escala de síntesis y asegúrese de que el material del recipiente no reaccione con el reactivo o el disolvente.
II. preparación de reactivos y materiales
Preparación del reactivo
Preparar aminoácidos para la síntesis, reactivos de activación, disolventes, etc., asegurando que todos los materiales sean frescos y puros para evitar la introducción de impurezas.
De acuerdo con el esquema sintético, se pesa de acuerdo con la proporción de sustancias necesarias para garantizar la precisión.
Los reactivos se cargan sucesivamente en cada botella de almacenamiento con las etiquetas correspondientes.
Preparación de resina
Añadir la resina al sintético de fase sólida, hinchar la resina con un disolvente adecuado (como dcm) y luego secarla.
Lavar la resina con disolventes como DMF para eliminar las impurezas y bombearla seca para su uso posterior después del lavado.
III. operaciones de síntesis
Establecer las condiciones de reacción
Establecer las condiciones de reacción adecuadas de acuerdo con la secuencia y longitud del péptido necesario, incluyendo temperatura, presión, tiempo, etc.
Desprotección
Eliminar el Grupo protector del aminoácido anterior para que pueda reaccionar con el siguiente.
Por ejemplo, se utiliza una solución de ácido trifluoroacético / Diclorometano al 40% para desproteger y luego se lava con diclorometano, metanol, etc.
Acoplamiento
Los nuevos aminoácidos se unen a los aminoácidos desprotegidos para formar enlaces péptidos.
Disolver el primer aminoácido (generalmente desde el extremo c) con un cierto volumen de DMF y añadir agentes de condensación (como dcc, hbtu, etc.) para activarlo.
La solución de aminoácidos activada se introduce en el sintético de fase sólida, se complementa con DMF a la concentración de reacción adecuada y se agita para la reacción de condensación.
Lavado
Limpiar las sustancias y subproductos no reaccionados para garantizar la pureza de la reacción.
Después de cada paso de síntesis, es necesario eliminar los subproductos generados por la reacción y las materias primas no reaccionadas mediante lavado para reducir la acumulación de impurezas.
Repita los pasos
Repita los pasos de desprotección y acoplamiento hasta que la cadena de péptidos alcance la longitud predeterminada.
IV. Corte y purificación de productos
Craqueo de resina
Configurar el lisado (generalmente contiene ácidos fuertes como tfa) y llevarlo al congelador delantero para su almacenamiento refrigerado.
Añadir la resina de péptido al reactor, añadir el lisado preconfriado y agitar la reacción para romper el péptido de la resina.
Después de la craqueo, se libera el líquido de reacción, se filtra por extracción para eliminar la resina y se lava con disolventes como tfa.
Purificación de péptidos
Transferir el líquido de craqueo al evaporador rotativo y concentrarlo a temperatura ambiente en un volumen pequeño.
El uso de precipitantes adecuados, como el éter de metilterc - butilo, precipita el péptido y obtiene el péptido grueso a través de pasos como centrifugación y lavado.
Los péptidos gruesos se purifican mediante métodos como la Cromatografía líquida de alto rendimiento (clar) para eliminar las impurezas y aislar los péptidos objetivo.
Concentración, filtración y liofilización
La solución polipéptida purificada se evapora para eliminar el disolvente orgánico y obtener una solución polipéptida concentrada.
La solución polipéptida concentrada se filtra estérilmente.
Coloque la solución de péptido filtrada en una máquina de liofilización y establezca un procedimiento de calentamiento adecuado para el tratamiento de liofilización.
V. control de calidad y registro
Monitorear el proceso de respuesta
Utilice métodos de detección adecuados (como detección ultravioleta, análisis de espectrometría de masas, etc.) para monitorear el proceso de reacción y asegurarse de que cada paso de la respuesta se lleve a cabo como se esperaba.
Registros e informes
Registre en detalle los parámetros de operación y los resultados de cada paso, incluyendo el uso de reactivos, tiempo de reacción, temperatura, presión, etc.
Generar informes experimentales y resumir datos clave e información sobre la pureza del producto durante el proceso de síntesis.