Sintético de péptidosLa calibración es el eslabón central para garantizar la pureza, la tasa de producción y la repetibilidad experimental de los productos sintéticos, y es necesario llevar a cabo una calibración sistemática de módulos clave como la precisión de la entrada de líquido, el control de temperatura, la estabilidad de la presión y el sistema de detección. El siguiente es un proceso de calibración paso a paso que cumple con las especificaciones de la industria y es adecuado para los principales sintéticos de péptidos de fase sólida.

I. preparación previa a la calibración: medio ambiente y preprocesamiento de equipos

Las condiciones ambientales confirman que la temperatura de laboratorio se estabilizará en 20 - 25 ° c (fluctuación ≤ 1 ° c) y la humedad relativa se controlará en un 40% - 60%, evitando que el flujo de aire sople directamente en el equipo. Iniciar el precalentamiento del equipo una hora antes de la calibración para garantizar que cada módulo esté en un Estado de funcionamiento estable.

Preparación de herramientas y materiales de referencia: preparación de equipos estándar certificados metrológicamente (como balanza electrónica de grado 0,01 mg, termómetro estándar, manómetro de precisión, pipeta estándar de 100 μl), así como reactivos de calibración como metanol anhidro (pureza cromatográfica) y solución estándar de Ninhidrina (0,1 MOL / l).

Limpieza e inspección del equipo: desmontar la tubería de entrada de líquido y la columna de reacción, enjuagar con metanol anhidro tres veces y secar; Compruebe la presión del cilindro de nitrógeno (≥ 0,5 mpa), reemplace la Junta de envejecimiento y asegúrese de que la tubería no tenga fugas.

II. calibración del módulo central: control preciso de los parámetros clave

(1) calibración del sistema de entrada de líquido: garantizar la precisión de medición del reactivo

Calibración del flujo de la bomba de entrada: seleccione el volumen de entrada comúnmente utilizado (10 μl, 50 μl, 100 μl), establezca la velocidad de entrada de 10 μl / s, inserte el final de la línea de entrada en el tubo centrífuga limpio pesado previamente y inicie el procedimiento de entrada. Cada gradiente de volumen se repite tres veces, se pesa la masa de metanol anhidro recogida con una balanza electrónica y se calcula el volumen real de entrada de líquido de acuerdo con la densidad de metanol (07918g / ML a 20 ° c), con un error de ≤ ± 2%, de lo contrario se ajusta la presión del cuerpo de la bomba o se reemplaza el anillo de sellado.

Calibración de la precisión de distribución de reactivos: conecte las diferentes tuberías de reactivos a la interfaz de pipeta estándar, establezca una cantidad de distribución única de 50 μl, repita la distribución 10 veces en El matraz aforado, verifique el error de volumen total con el método aforado y asegúrese de ≤ 1%; Al mismo tiempo, se necesita ≤ 0,5 segundos para comprobar la diferencia de tiempo en la distribución simultánea de múltiples canales.

(2) calibración del sistema de temperatura y presión: ambiente de reacción estable

Calibración de la temperatura de reacción: introduzca el termómetro estándar en el interior de la columna de reacción (cerca de la zona de resina), establezca tres puntos de temperatura comunes de 25 ° c, 30 ° C y 40 ° c, respectivamente, y lea el valor de la temperatura después de 30 minutos de aislamiento térmico, repita cada punto tres veces, el error debe ser ≤ ± 0,5 ° c. Si excede el estándar, corrija o reemplace el elemento de calefacción a través de los parámetros del módulo de control de temperatura del equipo.

Calibración de la presión de nitrógeno: cierre la salida de la columna de reacción, conecte el manómetro de precisión a la entrada de gas de nitrógeno, establezca la presión 0,1 mpa, 0,2 mpa, 0,3 mpa, estabilice la lectura después de 5 minutos, el error debe ser ≤ ± 0,01 mpa. Después de la calibración, se prueba la velocidad de soplado de nitrógeno para garantizar que la resina vuelca uniformemente y sin salpicaduras.

(3) calibración del módulo de detección y control: garantizar un monitoreo preciso del proceso

Calibración del sistema de detección de ninhidrina: preparar una solución estándar de Ninhidrina con concentraciones de 0,01 mmol / l, 0,05 mmol / L y 0,1 mmol / l, a través de la detección automática de muestreo del equipo, registrar el valor de absorción y dibujar la curva estándar, el coeficiente de correlación debe ser ≥ 0995. Si la línea no es buena, limpie el camino de luz de detección o cambie la fuente de luz.

Calibración del control del programa: escribir un programa sintético estándar (incluidos tres pasos de desprotección, lavado y acoplamiento) para registrar la desviación entre el tiempo real de ejecución de cada paso y el tiempo establecido, cinco veces cada paso se repite, y la desviación tarda ≤ ± 1 segundo. Compruebe la respuesta de conmutación de la tubería al cambiar los pasos para asegurarse de que no hay contaminación cruzada residual del reactivo.

3. verificación y registro después de la calibración: garantizar la validez de la calibración

Verificación de la operación sin carga: realizar el programa sintético sin carga después de la calibración, ejecutar tres ciclos consecutivos, comprobar el Estado de funcionamiento de cada módulo y garantizar que no haya fugas de líquido, ruidos anormales, deriva de parámetros y otros problemas.

Verificación de la síntesis de péptidos estándar: se seleccionó el pentapéptido estándar (como Leu - enkephalin) para la síntesis, y la pureza del producto se detectó mediante clar, que requiere ≥ 95%, y la desviación de los datos después de la calibración histórica es ≤ 2%, confirmando el efecto de calibración.

Archivo de registros de calibración: registro detallado de la fecha de calibración, las condiciones ambientales, el personal de calibración, el número de equipo estándar, los datos de calibración y los valores de desviación de cada módulo, pegar el logotipo de calificación de calibración y aclarar el próximo ciclo de calibración (se recomienda calibrar con antelación cada seis meses o 500 veces después de la síntesis).